作者cornere (corner)
看板Biotech
标题[求救] ubiquitination在Western blot中的smear
时间Thu Mar 8 23:08:29 2012
我最近利用IP-Western在看一个protein是否有被ubiquitination
因为是这方面的新手，实验室的成员也比较不懂这块，所以上来请教有经验的各位该怎
麽从我的data中判读它是否有被ubiquination，先谢过大家～
最初，
是在MG132 treatment之後发现我的target protein表现量明显增加，於是怀疑它可能会
被ubiquination。
於是之後我在细胞中同时over express我的target protein和HA-Ub，跑了Western
hybridize 我的protein，原本期望会看到protein因为被加了Ub而出现multiple band或
是smear的现象，但是却没有。而IP-Western正在做，预备IP-target protein，hybridize
Ub。
请问如果我的target protein是有被加上Ub的，那麽它在一般Western blot中就看得到
smear了吗?还是要在IP之後才看得到呢?
(注：我的protein很小，不到20 kD)
谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.66.13
1F：推 joseph103331:要做IP喔 用你的蛋白质IP hybridize HA 03/11 00:12
2F：→ joseph103331:但要做denature form的IP 不然会无法确定是binding还 03/11 00:13
3F：→ joseph103331:是共价修饰 03/11 00:13