作者gqqueen (够幸福了)
看板Biotech
标题[求救] 跑PI时出现奇怪的图形(已解决)
时间Tue Feb 28 02:13:14 2012
今天跑PI时，如往常般的处理细胞(70%酒精 over night)及染色，
以往在DMSO control皆会有G1.S.G2/M明显的peak，但今天要在重复实验时，
却在FL2A-counts图只出现一个山丘状的图形也很不sharp，完全没有其他的Peak产生
而在FSC/SSC图细胞也不是均匀散布，反而有点椭圆形致密，然後在FL2-A/FL2-W
也没出现正常的图形，反而是一条长长的细胞带状图，调了很多次数值也一样，
叫出以前同样细胞同样处理的condition也是找不出问题
想请教版上的专家，有在跑PI时碰过类似的情况吗？
细胞的处理:药物处理 24 48 72小时
Control:DMSO
细胞打下来前都有先观察，和先前的实验差不多，这是reapeat实验
先谢谢大家的帮忙了
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◆ From: 122.117.13.40
※ 编辑: gqqueen 来自: 122.117.13.40 (02/28 02:20)
1F：推 FireHell:参数跑掉了 02/28 02:34
2F：→ gqqueen:可以请F大再详细说明吗 不懂参数跑掉指哪一个? 02/28 02:45
3F：推 FireHell:FSC, SSC, FL2, FL2-A, FL2-W这些参数的Voltage和amp 02/29 13:06
4F：→ FireHell:要调一下 02/29 13:06
5F：→ FireHell:另外椭圆形和带状都是正常的耶 02/29 13:08
6F：推 qiet:flow cytometry有受过什麽调整过吗? 02/29 19:31
7F：→ qiet:有的话参数要重抓 但如果机器都正常...可能要想别的原因 02/29 19:32
8F：→ gqqueen:隔天我有先拿别株细胞测试是不是reagent出问题，跑完之後 02/29 22:17
9F：→ gqqueen:都是对的，所以我马上拿我有问题的sample从新跑一遍， 02/29 22:17
10F：→ gqqueen:最後发现出现peak怪怪的只有在48.72小时，而24小时的都很 02/29 22:18
11F：→ gqqueen:正常，所以目前把问题缩小到48,72小时细胞前处理哪个环节 02/29 22:19
12F：→ gqqueen:但原因现在还不清楚，我唯一想的到的可能，是细胞收下来後 02/29 22:20
13F：→ gqqueen:放在室温一个小时，不知道是不是这样的因素 导致MDA-MB-23 02/29 22:21
14F：→ gqqueen:细胞出问题，才会跑出奇怪的图形，不知道大家觉得这样 02/29 22:22
15F：→ gqqueen:的解释合理吗？这是排除人为操作，reagent，flow熟练度 02/29 22:22
16F：→ gqqueen:唯一的可能解释了，因为这个实验我repeat两次都没问题 02/29 22:23
17F：→ gqqueen:就在最後一次出了问题了@@" 02/29 22:24
18F：推 qiet:细胞收下来後固定前我都会放在冰上or4度C 避免细胞产生奇怪的 03/01 01:14
19F：→ qiet:变化 03/01 01:15
20F：推 lyu0001:可能是同一批细胞固定染色不完全 03/01 10:25
21F：→ FireHell:不同时间点的FSC和SSC可以参数不同，GATING范围不同 03/01 14:15
22F：→ FireHell:看起来比较像是细胞型态在48H後剧烈变化而没有GATING好 03/01 14:16
23F：→ FireHell:另外一个可能就是你的TREAT会导致S phase arrest 03/01 14:17
24F：→ gqqueen:给Qiet 我48.72小时细胞收下来後，就摆在架子上，大约一小 03/01 20:08
25F：→ gqqueen:时以上= = 当时後再做另一个实验，所以就没先处理了，下次 03/01 20:08
26F：→ gqqueen:我会先放在冰上看看 03/01 20:09
27F：→ gqqueen:给F大我跑PI只有gateingFL2-A/FL2-W这边，然後我发现48小 03/01 20:10
28F：→ gqqueen:时候的细胞，在FSC/SSC这边有几管出现疑似两群不同大小的 03/01 20:12
29F：→ gqqueen:的细胞，但他们还是有重叠，形状类似於兔子的耳朵但有交叠 03/01 20:12
30F：→ gqqueen:不知道这样形容贴不贴切 03/01 20:13
31F：→ gqqueen:48小时以後的细胞 03/01 20:13
32F：→ gqqueen:给L大我细胞都固定至少24小时，然後染色也有两个小时以上 03/01 20:14
33F：→ gqqueen:避光保存，这样还会发生染色固定不完全吗? 03/01 20:15
34F：推 FireHell:收细胞要快，所以放1h绝对不ok，不过会不会导致这些结果 03/02 15:12
35F：→ FireHell:不得而知，建议下次收细胞要连续之外，可参照这篇 03/02 15:12
37F：→ FireHell:另外注意流速控制在LOW SPEED 100 EVENTS/SEC 03/02 15:15
38F：→ gqqueen:谢谢F大提供这个很棒的资料，可以把参数条得更好，非常谢 03/02 22:18
39F：→ gqqueen:谢你，这次重做我不敢再放那麽久了，本来以为不会出什麽 03/02 22:18
40F：→ gqqueen:什麽问题，看来下次收下来前一定要先放冰上，尽快固定 03/02 22:19
※ 编辑: gqqueen 来自: 122.117.13.40 (03/02 22:19)
※ 编辑: gqqueen 来自: 122.117.13.40 (03/02 22:20)