试着回答一下 不过不确定有没有回答到你的问题 基本上酵素作用完要取protoplast的时候， 最简单的方法就是直接低速离心把protoplast离心到管子底部， 取掉上清液後，再用高张溶液把protoplast重新悬浮起来 我猜测你参考的protocol应该是为了更加保护protoplast， 所以把1.2M sucrose当作缓冲衬在protoplast跟管子底部之间， 以免protoplast在离心时挤压在管子底部受到伤害而影响存活率。 至於分层的问题，除非你的酵素处理液颜色很深，否则本来就很难有分层， 如果protocol正确的话，你应该是取在两种液体理论上的交界处 (在管子里加完1.2M sucrose後就可以在液面处做个记号， 两种液体低速离心时应该不容易混合，大部分protoplast也不会跑到1.2M sucrose里面) (要测试有没有取对地方的话，你可以每个地方都取一些拿去镜检) PS: 基本上做protoplast的小技巧超多的，你应该请教身边有做过的人比较安全 其他转型方法还有农杆菌、基因枪、电穿孔等 (by 花了三年在做真菌转型的人......) ※ 引述《peggie0903 (dwz.tw/57pn)》之铭言： : 大家好 我最近在做Aspergillus的transformation : 大致上是将孢子隔夜培养後 : 再用vino taste酵素处理两小时 去除细胞壁 得到protoplast : 之後再用1.2M sucrose为底 上层放培养液去离心 : 理论上protoplast应该会出现在培养液跟蔗糖的介面 : 但是我就是无法看到那明显的分层....... : 已经困扰很久了 拿不到protoplast的话就无法进行transform : 可不可以请有经验的版友 提供我真菌transform的方法？ : 或是提供一些意见 : 感谢大家了 --

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