最近实验要从微藻中萃取藻蓝素(藻蓝蛋白) 由於本身不是念生科相关科系,所以有很多paper的方法有看没有懂 目前实验只进行到粗萃部份 将藻粉溶於0.05M的Sodium phosphate buffer,经过三次的冷冻解冻打破细胞後 离心後取蓝色上清液,到这里是粗萃 接下来要纯化藻蓝素,paper上有写到是用50%的硫酸铵进行沉淀 沉淀後经离心取蓝色沉淀物,接着溶於小体积的5mM Na-phosphate buffer中 到这边为止是看得懂但还没去操作的 Q1:如何配置饱和硫酸铵溶液? 我是将400g的硫酸铵加入500mL的水中,加热到60度溶解,趁热过滤掉沉淀 接着放在室温下平衡,这样是否有错?? paper继续写到关於透析的部份,这部分就是我目前最头大的部分 原文如下: The dialysed PC was then placed in a 2.5 cm X 25 cm hydroxyapatite column (Bio-Rad Laboratories, CA, USA) and fractions were eluted with Na-phosphate buffer pH 7.0 of increasing ionic strength (from 5 to 150 mM). The fractions showing an absorbance ratio of 620 nm/280 nm greater than four were pooled and brought to saturation with ammonium sulfate. Q2:hydroxyapatite column 要如何使用?? 是买来就是像HPLC的column一样,还是要自己装填 又或者是他可以装在HPLC上?? Q3:increasing ionic strength from 5 to 150 mM 要如何操作?? 如果hydroxyapatite column是可以装在HPLC上的话,这个就不难解决 但如果不是的话,我就不知道该使用什麽了 Q4:蛋白质经过硫酸铵沉淀後一定要透析吗??如果不透析,可以直接打HPLC?? 这是最重要的一件事了,如果可以不透析,就可以省去很多花费 但就是不知道会不会伤到column(C4 column)与对实验造成误差 感谢大家看完我落落长的问题,恳请大家帮帮迷惑无助的我 感谢!!! --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 114.33.233.10