作者FireHell (冥煌 = 好硬)
看板Biotech
标题Re: [求救] MTT assay 处理组数值高於控制组
时间Sun Jan 1 21:56:25 2012
※ 引述《APPswe (What are you doing?)》之铭言:
:
: 小弟不才 在此发表一些个人浅见
: F大提供的这篇paper中 第109-110页提到下列两点:
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: 1.琥珀酸脱氢脢(succinate dehydrogenase, SDH)是细胞生长代谢产物
: 2.琥珀酸脱氢脢会分泌到细胞外 并附着在细胞膜上
:
: 作者对於这段论述并没有提供参考文献
: 为此 我自己查了一下生化课本
: 发现SDH是存在粒线体内膜 在电子传递链的作用中 扮演着重要的角色
: 似乎并不能算是一种代谢产物(?)
: 另外 为何在粒线体内膜的酵素会分泌到细胞外?
: 印象中在细胞凋亡时 粒线体膜的结构破裂 才会让其中的蛋白质被释放至细胞质中
: 假如正如作者所言 SDH会附着在细胞膜上 那其功能又为何? 生理功能又会是甚麽?
: 而SDH在细胞内又是甚麽反应的代谢产物呢?
非常感谢您提出的疑问。
其实之前在看我上一篇提供的paper时,我就已知道SDH是在粒线体内膜上,
因此对他的推论存疑 (在上一篇的推文我有提到)。
刚刚去查了一下,终於找到最可能的原因了!
http://0rz.tw/Gdmmf
第89页提到,MTT跟粒线体的电子传递链反应其实只占"小"部份
还很可能跟细胞"质"的NADH、NADPH等物质反应,我想wash非常有可能把这类物质洗掉。
那到底该不该wash呢?第90页有提到是「不需要」wash的。
我想这也是合理的,细胞质中的NADH、NADPH同样代表着细胞活性。
同时也可解释那篇残体paper中wash掉的上清液吸光值为何没有增加,
我想是因为wash掉的是substrate,而不是enzyme。
从酵素动力学来看,substrate不足会影响对enzyme活性的判断,
并直接反应在最终的实验结果与统计差异,这也是我之前遭遇的困境。
(可看我之前PO的求救文)
当然也代表我在第一篇的推文指出会把酵素洗掉的这点是不够严谨的,
应该说可能会把许多可与MTT反应的物质洗掉,特此更正!
希望这篇可以解决大家的疑惑:)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.218.89
2F:→ blence:如果实验的treatment会可能干扰NADPH pool却不见得细胞死亡 01/01 23:18
3F:→ blence:最保险的方法是测MTT前务必wash,免得有额外因素干扰 01/01 23:20
※ 编辑: FireHell 来自: 140.112.218.89 (01/02 13:06)