作者lucasee (黑)
看板Biotech
标题[求救] transwell的问题
时间Sun Dec 11 17:46:31 2011
各位版友好
小弟想请问transwell使用上的问题
小弟最近在进行macrophage migration的实验
使用的是corning 24-well 8-um的transwell
首先在上层seeding细胞
待贴附後换serum free medium(200 ul)并且在下层加入含有M-CSF的medium(350 ul)
反应2 hours(也试过24 hours)後刮去上层细胞(用棉花棒)
接着固定染色并割下membrane做镜检
然而我发现下层未加入M-CSF的negative control也有大量的细胞...
目前发现可能的原因应该是下层的液体只要稍微盖过上层的membrane就会渗过去
这样是正常的吗 因为如此不就失去原本浓度梯度的效果了
不知是否因为这样导致实验失败
P.S 有确认过下层的液体并没有比上层well高
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.133.84.58
1F：→ allergy1115:1.pore size 有点大 2.静至细胞会有重力作用,我自己用 12/12 04:57
2F：→ allergy1115:用5um,多数细胞都卡在pore,下层机呼啥细胞,给你参考 12/12 04:58
3F：→ allergy1115:下层几乎没啥细胞 12/12 05:00