作者somn (somnambulism)
看板Biotech
标题[讨论] 用Trizol抽DNA
时间Mon Nov 21 16:27:51 2011
如题
本来我们家的Trizol都是抽RNA用 (废话..= =
最近刚好有要抽rat cultured cell的DNA
因为刚好说明书里有说可以~ 就顺道想说试一次也好
前半部到phase separation为止步骤都跟抽RNA时一样还没啥问题
重点是...分层之後 (尽量的拿掉最上清液後)
它说要加
100% ethanol
可是我们之前买的实验用酒精都是写99.99% 这样应可以吧!?
接下来DNA Wash 就更雾煞煞了
首先是wash solution的配制
它说要0.1M sodium citrate in 10% ethanol
问题是...那10% ethanol是溶在?? 水里吗?
然後更不幸的 我们实验室没有sodium citrate...
这个Wash solution有没有其它配方可以代替呢?!
然後溶出DNA是用8mM NaOH~
给个大约量是用300~600λ per 不同细胞来源
这边没什麽问题!
最後一个是保存方面 说明上有写说
for prolonged storage, samples should be adjusted with HEPS to pH 7~8
and
supplemented with 1mM EDTA.
後面EDTA那句我看不是很懂...
因为照上段讲的~ 用NaOH去溶
要保存用HEPS去调pH值 这还能理解
可是加EDTA....是要怎麽加才能变成1mM ??
因为到这一步为止
tube管子里的体积已经有NaOH跟HEPS了
因为总体积都是λ等级了 如果要算出终浓度是1mM的EDTA
这....也太微量了吧 = =
且EDTA应该也是先泡成solution再加进去
我不太懂到底是上面我标黄色字那一行字的意思到底是.....啥意思!?
虽然知道用Kit比较快
但目前就是刚好没Kit...
谢谢大家看完 = =
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◆ From: 140.116.243.66
1F:推 Realthugz:那就别加EDTA阿 11/21 19:55
2F:推 aceliang:阿不就stock 11/21 20:26
3F:→ aceliang:ethanol就用无水酒精罗 11/21 20:27
4F:→ keepseaching:要长期保存才需调pH值与加EDTA 11/21 22:45
5F:→ keepseaching:Wash那一步建议还是用sodium citrate会比较好 11/21 22:46
6F:→ keepseaching:Wash buffer的配法是用水溶没错 11/21 22:49
7F:→ keepseaching:若需更多协助可以寄信给我 11/21 22:50