作者zz55 (ss)
看板Biotech
标题[求救] 细胞冷冻时medium变色
时间Sun Oct 16 16:54:17 2011
很久之前在板上有问过关於细胞冷冻的方法
我们lab目前是仍然是这样的，有4度/-20度冰箱 和液态氮
之前保存细胞时都是配好90%的DMEM+10%的DMSO
直接放到-20度 1~2小时 之後丢入液态氮
因为之前养的都是3T3，细胞保存密度约有2~5*10^6 /mL
每次解冻虽然没有细数，不过总之就是细胞仍能健康继续养的程度
後来在一本"组织工程" (徐善慧老师着)上
看到在液态氮管口放30分钟就可直接冻入液态氮中的方法
不知道有没有人试过?
因为最近养的细胞比较珍贵，很怕把他养死
想问的是，为什麽冷冻时medium有时会呈粉红色，有时候会变成橘色或黄色?
如果变色，细胞会不会死掉??
因为
1.在液态氮管口30分钟的细胞，要放进去时变成鲜黄色，过段时间在看变有点橘
2.在-20度30分钟，管口30分钟在放进去的是粉红色
3.在-20度1.5小时的也是粉红色
不过，组1用的是分装成50mL小管，50mL满的medium(本来就偏橘)
组2.3用的是50mL小管中最後的5mL(本来就偏粉红)
想请问板上的强者先进们这些现象是正常的吗
如果我在一两天之後解冻这些细胞，测试存活度，和一两个月後解冻的效果是否相同?
有许多问题希望有人能回覆，非常谢谢!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.182.185
1F：推 aceliang:有一种可以放在液态氮桶口旋转下降的冻细胞工具。 10/16 18:27
2F：推 spirithorse:我也发现同一批冻的细胞,从液态氮拿出来後颜色会不同 10/16 18:32
3F：→ spirithorse:但是解冻後没有什麽影响. 细胞放在-20结冻後,尽量隔 10/16 18:32
4F：→ spirithorse:天就丢到液态氮桶里,我有解冻过学姊放在-20半年的 10/16 18:33
5F：→ spirithorse:细胞...死一堆.所以是有差的!!(推眼镜) 10/16 18:33
6F：推 Realthugz:因为一般都放-80 10/16 18:39
7F：推 conective:一般应该是4→-20→-80→液态氮 10/16 18:41
8F：推 moons:我们都放渐冻盒直接丢-80，隔天放液态氮 10/16 21:59
9F：→ spirithorse:天阿~我打错了~ 我是丢-80.... 10/16 23:03
10F：推 allisa:放渐冻盒再放到液氮里是比较好的做法 提高存活率 10/18 13:47
11F：→ allisa:变色是不会影响 我们也有这种情形 10/18 13:48
12F：推 Realthugz:能够不用isopropanol吗 @@ 会死翘翘吧 10/18 15:16
13F：推 allisa:isopropanol不会跑到冻管里阿 为什麽会死翘翘?? 10/19 00:20
14F：→ allisa:或者现在有新型渐冻盒不用加isopropanol的 10/19 00:21
15F：→ Realthugz:XD 我的意思是能够不用冻盒直接进冰箱吗 10/19 20:01
16F：推 coolamber:老师给我们的步骤是4度 30min→-20 2hr→-80 overnight 10/20 03:26
17F：推 coolamber:→液态氮 然後...medium变色是ph值有变化了吧... 10/20 03:29