Hello, 我也养RAW.. 不过我的冻法跟您有些不同, 但我倒是从来没有细胞不贴的情况, 1. 我家的RAW是吃RPMI的, 不过medium应该不会差异大太 2. 我的DMSO是配在FCS中, 浓度20% (This is stock) 3. 将细胞收集下来後用纯FCS suspend加等量的20% DMSO (Final conc. 10%DMSO), 再丢宝丽龙盒中丢-80 overnight在进LN2. 用这样的冻法不只是RAW, 我养过的细胞从来没有任何问题喔^_____^ 希望有帮到您的忙, 有疑问的话再互相讨论喔^__^ Good luck to your experiments. ※ 引述《shufa (123)》之铭言： : 发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出 : 以方便板友帮您追踪问题 : ----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章---- : 目前我冻细胞的方式如下： : 将满盘的细胞 以PBS WASH後 加入少许的MEDIUM : 以刮的方式将细胞收集 随後以离心的方式(1300RPM 30MIN 4度C) : 收集细胞团并加入含5％DMSO的medium(配完即放入冰桶中) : 冻细胞时间如下： 4度c 30min : -20度c 30min : -80度c overnight（16~18hr） : 放入液态氮中保存 : 要使用前解冻 就先在37度c下回温 : 然後seeding於10cm盘培养overnight : 但隔天要换medium时 发现细胞都没贴盘～～ : 不知道是出了什麽问题？ : 有去询问当初给细胞的人 他是说 必须很小心 不能很大力的冲 : 但是此次作出的结果还是不会活 : 因此想请问是否有什麽技巧或步骤仍需要改善的？ : 先谢谢大家的回答！感恩～～ --

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