※ 引述《ab15920 (瘾)》之铭言： : 请问大家~ : 我的蛋白质是一种cytokine : 很小(8~14 kd)且量也很少 其实这样的分子量不算很小。 : 我用western 来做…..都压不到band : 另外有用ELISA测过，量大约为5000 pg/ml (这是我有overexpression後的) : 请问一下~ : Western 是因为量太少，所以才压不出来吗? : 还是western 方面上有哪些地方需要注意的 你可以试试看浓缩。 取 30 kD ultrafiltration 的透过液（分子量小於 30 kD） 再用 3 kD ultrafiltration 浓缩。 或许你就可以压到。 如果你希望保留你的 positive control 在同一个 fraction 中， 可以调整 ultrafiltration 的 cut-off molecular weight。 还有另外一种方式，就是增加侦测敏感度。 像是用 isotope labeling。 : 再来就是， : ELISA的结果可以取代western的结果吗? (因为我想都是测protein表现量) ELISA 跟 western 是不一样的实验。 ELISA 是全盲，吸光告诉你蛋白质量有多少就多少。 但是 sample quality，non-specific Ab-Ag interaction 都有可能影响 ELISA。 当然，ELISA 是个相当方便的方法， 如果你的抗体是商品化的试剂组， 而且操作手册上载明你用的 cell type 没有非专一性反应， 那或许可以就用 ELISA 来同时定量跟定性。 （很多实验室还是会希望有 Western blot 的图） 但如果是 heterologous expression，那就不要完全相信 ELISA 结果。 : 麻烦大家帮我解决这困扰很久的问题噜~ : 非常感激 如果你不想要进行 ultrafiltration， 但是你还是想知道你的 ELISA 是不是够专一性的话， 也可以拿 ELISA 的 monoclonal antibody 进行 immunoprecipitation， 然後跑 SDS-PAGE 染银染或是再压 Western。 -- --

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