大家好 目前在研读一篇有关於利用bacmid system表现EV71之VP1的相关paper 有些东西查了好久了 却一直找不到自己可以信服的解答 想向大家请教! 首先是不知道台湾除了国卫院以外哪里有P3以上的实验室...? 也就是可以做对小鼠进行virus challenge的实验的地方 (印象中之前环安卫课程有上过 但是书不见了...) 接着 在许多文献中都会读到 小鼠只有在哺乳期可以被EV71感染 当成年之後就会对这个病毒有抗性 我不太懂的地方是是什麽原因造成幼鼠和成鼠对於相同的一个病毒会有不同的抵抗能力? 再者 我在bacmid(baculovirus shuttle vector)的部分 (以下是他的使用手册 我在几个页数有些问题...) http://tools.invitrogen.com/content/sfs/manuals/bactobac_man.pdf 在donor plasmid的地方 在手册中第59 60 页中有提到pFastBac HT A上面具有一个TEV recognition site 是用来让AcTEV protease将N端的tag清掉的 我想问的是这个protease的来源是baculovirus?还是一般昆虫细胞里面有? 另外我看不太懂上面说要来把他清掉的目的... 不知道有没有曾经做过这个实验的同学老师们可以稍为为我讲解一下...... 最後是一个有关於病毒的问题 bacmid所制做出来的baculovirus 据资料所说是可以进入哺乳类细胞中的 若现在将於昆虫细胞中表现的promoter polyhedrin 置换成能够於昆虫细胞和哺乳类细胞都大量表现的promoter (如上面paper选用的WSSV Pie1 一个极早期的promoter) 以下是我的预测结果...(promoter置换後) 可以进行表现 产生蛋白质(因为会进入细胞) 但是并没有办法进行复制(因不会崁合入宿主DNA中) 其实这个推论比较像是我自己希望的结果... 对这个置换promoter还有另一个问题 原本Ppolyhedrin是杆状病毒为了在晚期表现polyhedrin形成occlusion body而存在 现在若是改变了一个promoter 将他换成上述的WSSV(虾白点病毒)的promoter ie1(极早期promoter) 这个基因启动的时机会因此而改成杆状病毒感染後的极早期吗? 关於病毒promoter的方面一直有些问题尚待厘清 一个比较基本的问题 当我们说一个病毒可以感染A生物体(如杆状病毒之於昆虫细孢) 意思主要是他有办法利用A生物体内的聚合酶进行复制 但若将该病毒换到不同种的B生物体(如将杆状病毒转移到哺乳类细胞) 没办法进行复制的原因是因为这个病毒没有办法利用B生物体的酵素吗? 若是 那不能使用酵素的原因可能是..... 抱歉...问题稍多... 而且想一想新的问题就又飘出来... 希望有机会可以厘清 麻烦各位了 有任何资料缺失会立刻提供! --

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