作者mournermind (阿蒙)
看板Biotech
标题[求救] EMSA的cross-linked问题
时间Fri Sep 30 00:04:28 2011
最近用Thermo的kit在做EMSA
但是做了四次有三次压片完全没东西!!!(我DNA放非常浓 所以成功那一次非常亮!)
所以我怀疑是transfer之後的过程有问题!
我run gel是用 TB buffer 先pre-run 220V 40mA (两片,TB buffer必须要220V才能到40mA)
1hr , 再220V 20mA 2hr
之後transfer到PALL的Nylon membrane (positive charge) with 0.5 X TBE 100V 380mA
(两片) transfer後等了大概五到十分钟才拿起来用机器crosslink 3min
(我所用的PALL membrane上面写说可以不用crosslink....)
之後完全照manual....
实在不清楚 到底是哪里出问题 怎麽会membrane压片压超超超久都还是没东西....
请问有哪位先进也有这问题的吗? 最後是怎麽解决的呢? 谢谢
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◆ From: 140.113.173.247
1F：→ Danielle:是lightshift吗?抗体不要reuse, 我有一次reuse就啥都没有 10/03 14:57
2F：→ Danielle:如果你dna又放很多 抗体在第一次就被抓光了 10/03 15:02
3F：→ mournermind:了解！！谢谢您！！我试试看！ 10/03 17:14