作者lovenainai (lovenainai)
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标题Re: [求救] 请问RNA去除genomic DNA的方法
时间Thu Sep 29 16:07:13 2011
如果要做 qPCR 用 TRIzol 抽的 RNA 非常容易有gDNA污染
用 DNAse 处理并不好 因为加温过程中 RNA 会 degrade 得很厉害
而且你的 buffer 跟 DNAse 都还留在里面
我觉得用 Lithium Chloride 沉淀拿到的 RNA 最纯 便宜 又快速简单
但是缺点是 300bp 以下的 RNA 没办法有效率的沉淀 而且RNA浓度太低也不能用这招
protocol:
7.5M LiCl in DEPC-H2O (store at -20)
add 1/2 volume 7.5M LiCl to your RNA sample (after TRIzol)
leave in -20 >1hr the longer the better
Spin at top speed
discard supernatant, wash 1X w/ 70% EtOH
Spin again
leave air dry ~15min
recover in DEPC-H2O
※ 引述《cqw80000 (草履虫)》之铭言：
: 目前的状况是这样的,我们实验室是用TRIzol抽取RNA.
: 抽取的过程中也很顺利,RNA跑完电泳後发现有genomic DNA残留.
: 但是因为要把RNA反转录成cDNA,所以目前是先取出要反转录的RNA的量出来.
: 取出来後打算加入DNase I於37度C作用30分钟後,再於65度C作用5分钟使DNase I失活.
: 我的问题就是在去除genomic DNA的过程中,不知道会不会使RNA降解?
: 假如RNA会降解的话,请问前辈还有什麽方式可以去除已经萃取好的RNA中的genomic DNA.
: 感谢!
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◆ From: 24.184.89.77
※ 编辑: lovenainai 来自: 24.184.89.77 (09/29 16:08)
1F：推 leoblack:真的要那麽纯的,乾脆做CsCl banding好了 09/29 19:46
2F：→ huuban:之前CTAB法最後也是LiCl，但还是有残留问题..还是看样本吧 09/29 22:36
3F：推 chiehdis:因为我的实验也有用到LiCl 所以并不是TRIzol去DNA的效果 09/30 03:26
4F：→ chiehdis:好!!是LiCl的功效吗????? 天啊!!(震惊!!) 09/30 03:27
5F：→ chiehdis:我用氯化锂主要是用来去多醣的~~ 09/30 03:29