作者cqw80000 (草履虫)
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标题[求救] 请问RNA去除genomic DNA的方法
时间Tue Sep 27 22:17:50 2011
目前的状况是这样的,我们实验室是用TRIzol抽取RNA.
抽取的过程中也很顺利,RNA跑完电泳後发现有genomic DNA残留.
但是因为要把RNA反转录成cDNA,所以目前是先取出要反转录的RNA的量出来.
取出来後打算加入DNase I於37度C作用30分钟後,再於65度C作用5分钟使DNase I失活.
我的问题就是在去除genomic DNA的过程中,不知道会不会使RNA降解?
假如RNA会降解的话,请问前辈还有什麽方式可以去除已经萃取好的RNA中的genomic DNA.
感谢!
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◆ From: 118.165.57.164
1F：推 f9361046:1.会 2.没太大影响吧 有点忘了XD 09/27 23:02
2F：→ f9361046:我这样做也可以维持1.8~1.9 band也很明显 所以我想没差吧 09/27 23:06
3F：推 Ianthegood:看你操作够不够乾净阿 不小心有RNAse掉进去就毁啦XD 09/27 23:13
4F：→ cqw80000:请问前辈反转录好的cDNA跑电泳的图大约会是怎样子? 09/27 23:13
5F：→ huuban:多少都会漏失一些RNA，应该是没有降解这个问题吧.. 09/27 23:34
6F：→ huuban:印象中做双股跑出来是smear，单股我不知道 09/27 23:35
7F：推 datro:应该说 目的是要啥? PCR的话 primer 设计跨EXON就好 09/28 00:23
8F：推 Realthugz:RT没有specific primer就拿去跑应该一片亮晶晶吧 09/28 02:20
9F：推 untilnow:1 会 2.可以外加如ribolock等RNase inhibitor 09/28 10:51
10F：→ cqw80000:datro大,我是要往下进行Q-PCR,所以primer设计跨exon就好 09/28 17:31
11F：→ cqw80000:吗?,那是不是就可以跳过用Dnase I treat的步骤? 09/28 17:31
12F：→ cqw80000:另外,感觉各位前辈都会加RNase inhibitor,但是假如不考虑 09/28 17:34
13F：→ cqw80000:RNase的污染,纯粹的37度C和65度C会不会直接使RNA降解? 09/28 17:35
14F：推 icome:用amplification grade DNase I 效果很好 09/30 00:21
15F：推 huuban:37度30分钟和65度10分钟是不会使RNA降解的 10/01 22:54
16F：→ huuban:另外，室温24小时也不会有问题..至少band都看得到 10/01 22:55