作者josephkokomo (...)
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标题Re: [求救] 有关 DNA methylation 的实验
时间Sun Sep 18 18:05:31 2011
※ 引述《jeffsu (欧巴马)》之铭言：
: 最近接到老师的新题目想探讨转移基因启动子的甲基化与癌症转移的相关性
: 我们将癌细胞处理SAM(NEB) 5days(每天换药)，收DNA来观察
: 发现随者SAM浓度提高，去甲基化的现象反而越来越明显，而且有dose
: (我们有设计甲基化跟非甲基化primer，甲基化随SAM浓度上升而下降，非甲基化则上升)
: 而且我们也有放positive control证实primer没有加错(只有甲基化primer有出来)
: 於是我接下来用一样的方法加药完 收RNA
: 上real-time PCR 也发现转移基因的表现随SAM处理而上升
: 跟DNA的结果很符合
: 但问题来了，SAM是一种adomet应该会造成基因的甲基化，使转移基因的表现下降
: 但我的结果却刚好相反，重复几次也确定要浓度没加错，想请问板上的高手可能的原因
: 我们是参考这篇paper:Cancer Res 2007; 67: (3). Fbruary 1, 2007
贵实验室是如何备制SAM的
SAM 本身在水溶液中非常不稳定 会随着时间增长而degrade 成SAH
而SAH 会inhibit methyltransferase
建议跑个HPLC 确定SAM的纯度
NEB卖的SAM 也只有写80-90%纯度
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.64.89
1F：推 jeffsu:感谢版友提供的意见 可是要加入细胞中SAM势必要加入medium 09/19 02:43
2F：→ jeffsu:想问看看有没有办法能维持SAM在溶液中的稳定性? 09/19 02:45
3F：→ jeffsu:我们买来的SAM(NEB) 一开始就溶在液体中 09/19 02:47
4F：→ sancra:有无收signle dose, time course的data? 09/20 01:49
5F：→ sancra:我觉得如果是drug stability的问题，可以抓时间点看看 09/20 01:50