作者lovenainai (lovenainai)
看板Biotech
标题Re: [求救] 磷酸化蛋白
时间Sun Sep 11 23:52:23 2011
你已经有这个蛋白质的抗体了
加药处理 做个 IP 去 pulldown pTyr/Thr/Ser
然後看加药处理後你的 protein +/- 不就好了...
※ 引述《Rarelay ()》之铭言：
: ※ 引述《lookfor0326 (find)》之铭言：
: : 不好意思...
: : 想请教一个小小的问题
: : 由於目前的实验是以药物测试蛋白质的改变
: : 但WB结果显示target蛋白质并无减少或增多的情况，
: : 於是想要去探讨有没有可能会是影响到target protein磷酸化，
: : 但因为手边没有target protein 磷酸化抗体可以用来测试这个问题，
: : 因此想要请教大家:
: : 检测这类的问题(磷酸化蛋白)是不是只能靠抗体才能解决了。
: : 谢谢~
: 我不知道这个磷酸化位点是已知还是未知。
: 假设他是已知的，
: 你可以考虑将之突变成 A or D (E)
: 若你推测他是处理药物会磷酸化，那就突变成 A，
: 处理药物应该会不受药物影响，同 negative control 表型。
: 你就可以确定磷酸化的确在药物处理後细胞产生反应中扮演重要角色。
: 若是处理药物会去磷酸化，则用 phospho-mimic 胺基酸 D or E。
: 如果是未知的，那你可以考虑纯化蛋白後，
: 用 TiO2 enrich phosphopeptide 进 LC-MS-MS 分析。
: 如果不知道蛋白质或是不知道药物处理後的 phenotype，
: 那我就没办法了（我想可能性很小）。
: 喔对了，
: 如果是常用的 anti-phospho peptide 的抗体，
: 买来应该是最省事的。
: 如果是新的机制，而且必须要处理少人研究的蛋白质，
: 那谨慎点先确认再打抗体会比较理想。
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◆ From: 24.184.89.77
1F：推 lookfor0326:谢谢大家...大家真的都好专业。 09/12 12:32
2F：推 yuyao:这个方法比较直接又简单 09/12 14:16
3F：→ Ice9:或者在使用p32磷酸化後，再用lovenainai大的方式IP下来。 09/17 18:46