※ 引述《saviora (飓风之翼)》之铭言： : ※ 引述《Rarelay ()》之铭言： : : 我不知道这个磷酸化位点是已知还是未知。 : : 假设他是已知的， : : 你可以考虑将之突变成 A or D (E) : : 若你推测他是处理药物会磷酸化，那就突变成 A， : : 处理药物应该会不受药物影响，同 negative control 表型。 : : 你就可以确定磷酸化的确在药物处理後细胞产生反应中扮演重要角色。 : : 若是处理药物会去磷酸化，则用 phospho-mimic 胺基酸 D or E。 : : 如果是未知的，那你可以考虑纯化蛋白後， : : 用 TiO2 enrich phosphopeptide 进 LC-MS-MS 分析。 : : 如果不知道蛋白质或是不知道药物处理後的 phenotype， : : 那我就没办法了（我想可能性很小）。 : 假如这个(去)磷酸化的位置对於蛋白功能扮演相当重要的角色 : 把这个位置做point mutation 就算药物不是控制这个磷酸化的调节 : 一样会看到negative control 表型 : 例如说把IkB的磷酸化位点的点突变 进而造成IkB不会被ubiquitination : 而一个未知的药物A是调控IkB ubiquitination的部分 : IkB的磷酸化位点的点突变没办法看出这个药物到底是调节哪个部分 : 这是敝人愚昧的见解 请多多指点 谢谢 你说的完全正确。 所以如果反向 mutation， 例如处理药物会 phosphorylation, 那突变成 A 就会变成 negative control， 但是突变成 D or E 就必须要像是药物处理过的表型。 当然， 任何一个实验都只是一个角度， 如果可以由完全不同的实验概念得到相似的结果， 结果也会更具说服力。 -- --

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