作者wintercoldb (balance)
看板Biotech
标题[求救] Realtime PCR
时间Wed Sep 7 15:41:52 2011
新手第一次发问
最近在做一批microRNA的实验
先从血清将microRNA用trizol LS抽出後
用nanodrop测出OD值 稀释到固定浓度後
转RT
转完RT後用ABI stepone plus realtimePCR做相对定量
每个sample都有做 三重复
问题来了
同样的检体 分开转RT後再定量CT值都差了3-4左右
请问是什麽原因造成呢???
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.33
1F：推 DJHINN:为什麽同样的检体要分开RT = =? 09/07 15:45
2F：→ DJHINN:而不是RT完後再分装? 09/07 15:46
3F：→ DJHINN:有没有先测检体的RNA浓度? 09/07 15:47
4F：→ wintercoldb:因为第一次测RT的NC污染 所以重转重定量 09/07 16:56
5F：→ wintercoldb:有用nanodrop测RNA OD值 09/07 16:56
6F：→ wintercoldb:两次结果不同 就一直被老板问为什麽会不同 = = 09/07 16:57
7F：→ wintercoldb:除了因为污染还有可能是什麽原因呢? 转RT的效能也不同 09/07 16:57
8F：→ wintercoldb:?? 09/07 16:58
9F：推 ararthur:去看一下abi software里Ct值的threshold line是否合理 09/08 10:53
10F：→ ararthur:有时step1+ 会没设定好threshold要改成manual去调整 09/08 10:53
11F：→ ararthur:另外RT的牌子是? 可以试看看invitrogen和qiagen的 这两组 09/08 10:54
12F：→ ararthur:我做出来同一组sample都稳定许多 有用过便宜牌子结果三重 09/08 10:54
13F：→ ararthur:覆Ct值也是差很多 两个点可以去看看 09/08 10:55
14F：→ wintercoldb:感谢以上回答 会再去研究看看thx 09/08 11:32
15F：推 DJHINN:差...3~4个 Ct 我觉得蛮夸张的...虽然 RT 可能效能有差.. 09/09 01:09
16F：→ johanjohan:microRNA? 09/10 00:24