作者cmublue (BLUE)
看板Biotech
标题[求救] real-time PCR 试剂问题
时间Sat Sep 3 13:37:59 2011
小弟实验室的real-time PCR机器是用ABI step one plus
之前是使用Roch的reagnt
最近刚换了一家新厂牌的SYBR green reagent
(KAPA SYBR FAST qPCR kit, Master Mix 2X ABI Prism)
发现在melt curve中会出现 double peak
起初以为是primer 污染 , 但是在做检测时发现(primer重泡)
就算是negative control (只load 水)
不只有melt curve 还会有一般的萤光讯号 (28-30的cycle附近)
要说这是污染 为免污的量也太大了吧
目前是还没去将p出来的产物拿去跑胶
想请问各位先进, 除了primer污染之外,还有什麽其他的因素会有可能造成这个现象
ps我记得业务有说过他们家的这个reagent SYBR green下很重 ,所以讯号都会很强
但跟我这个结果有关系吗= =
以上 感谢各位帮忙解惑 ^ ^/
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◆ From: 140.128.67.246
1F：推 Rarelay:我只加 template or 只加 primer set 都没有讯号 09/03 14:59
2F：→ Rarelay:忘了说我是用 KAPA Universal Reagent 09/03 23:04
3F：→ nexusfantasy:你的 negative control 是指没有 template 吗？ 09/03 23:47
4F：→ nexusfantasy:还是全部都是水 给机器去读？ 09/03 23:48
5F：→ nexusfantasy:要先排除掉是primer dimer的可能性 才考虑background 09/03 23:51
6F：→ nexusfantasy:KAPA我之前用在bio-rad的机器 效果还ok 没什麽问题 09/03 23:52
7F：→ cmublue:N大,yes只load水和primer with reagent (no template) 09/04 02:52
8F：→ nexusfantasy:你的internal control是否也有两个波峰？ 09/04 13:10
9F：→ nexusfantasy:若没有 可能是target gene引子设计或黏合温度的问题 09/04 13:11
10F：→ TauriCrab:就污染 不用太相信厂商 09/09 16:57