作者mikis1107 (mikis1107)
看板Biotech
标题[求救] 请问冷东切片萤光染色结果与WB不符合
时间Thu Sep 1 17:49:26 2011
我是做心脏autophagy现像
取病人组织做免疫萤光染色与WB来判别
1.WB结果A病人的LC3Bb II表现量高 B病人的则没有
推测A病人的心脏autophagy比较明显
但是在冷冻切片的结果却完全不同
A病人的心脏切片Myolysis现像很少
细胞染F-actin的状况下, 细胞有空洞的很少
B病人的心脏切片却有许多空泡产生
Q1: 是否应该将组织换各个不同的面切切看?
说不定正面细胞较健康但另一面的细胞却有很明显自嗜作用??
2. 染LC3B的切片结果也很怪
几乎整个细胞都有染到LC3B,根本也看不出来哪一个病人表现量高
我是1:400 dilute在过滤的PBS里面
萤光显微镜下本来希望A病人可以看到LC3B II 的particle的产生
但是现在根本看不出趋势
Q2: 是否应该降低稀释倍率, 再以confocal来观察??
由於组织上面有很多黄色的小点干扰
所以对於particle的判定也会有影响
推测应该是RBC但是因为是开刀房学姐帮忙包埋
在第一时间也无法得知他们是否有将组织清洗乾净
Q3: 是否应该在取回组织的同时再自行清洗後重新包埋一次??
搞了好久都做不出好看的data
真的很泄气T____T
谢谢各位了~~@@
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◆ From: 223.141.119.146
1F：→ sancra:LC3B II只是中间形成autophagosome的一个过渡状态 09/03 13:34
2F：→ sancra:所以应该不能拿wb的结果跟单纯HE切片结果比较 09/03 13:35
3F：→ sancra:另外LC3B II本来整个细胞都会有的，只是有autophagy会形成 09/03 13:35
4F：→ sancra:particle而不是散布在整个细胞 09/03 13:36
5F：→ sancra:所以要做IHC是否换个不同的marker去染会比较好呢?像Atg 09/03 13:36