作者jeffdon2 (kkk)
看板Biotech
标题[求救] 人类红血球的萤光染色
时间Mon Aug 29 15:10:13 2011
想要请教各位生医底子比在下强n倍高手，关於红血球的萤光染色用nile red是否恰当
小弟的染色步骤是先取3ul的血球溶到等渗透压的蔗糖水溶液内加以轻微晃动分散，
接着将nile red染剂2ul加入，一样轻微晃动5分钟使其均匀混和，最後以离心置换蔗糖
水溶液的方式将多余的染剂去除掉(清洗两次)，再加入调整过导电度的等渗透压buffer
可是问题来了，经过离心清洗过後红血球变得相当难分散，在显微镜底下确认过都聚集
成一团一团的状况，想请教的问题是有可能是nile red的影响导致抗凝血剂失效吗，又
或是说抗凝血剂本身有问题?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 111.242.179.28
1F：推 leoblack:清洗过程是不是会把抗凝血剂冲淡?!蔗糖水是否要抗凝血剂? 08/29 18:02
2F：→ jeffdon2:多谢l大的提醒，只是抗凝血剂有在单卖吗? 08/29 18:45
3F：→ jeffdon2:当初是买整组的抗凝血玻璃管，不清楚是否有单卖 08/29 18:46
4F：推 malakaki:Buffer配方提供一下~ 08/29 22:37
5F：推 weisheng0518:是用 EDTA tube (紫头管)吗? 08/30 02:12
6F：→ weisheng0518:PBS 洗三次, EDTA 洗掉, 凝血因子也洗掉了 08/30 02:13
7F：→ weisheng0518:还会 agglutination 大概是没洗乾净 08/30 02:14
8F：→ weisheng0518:还有, 高浓度的 sucrose 会抑制 agglutination 08/30 02:15
9F：推 weisheng0518:FYI, 洗乾净的 RBC, 室温一个礼拜都不会 08/30 02:18
10F：→ weisheng0518:agglutination. (没乾掉的话) 08/30 02:19
11F：→ jeffdon2:weisheng0518大，是用EDTA tube (紫头管)没错 08/30 11:00
12F：→ jeffdon2:buffer的话是sucrose300mM+PBS去调整导电度 08/30 11:01
13F：推 weisheng0518:如果PBS洗完还是一堆 agglutination, 08/30 11:04
14F：→ weisheng0518:我猜是采血完没跟 EDTA mix 均匀. 08/30 11:05
15F：→ jeffdon2:所以weisheng0518大的意思是抗凝血玻璃管有问题吗? 08/30 11:07
16F：→ weisheng0518:300 mM sucrose 很高. 有non-specific inhibition 08/30 11:07
17F：→ weisheng0518:是用过期的紫头管吗?? @@a 08/30 11:08
18F：→ jeffdon2:学长是有觉得这次买得管子里抗凝血剂有点少，而且还有凝 08/30 11:11
19F：→ jeffdon2:结在管壁的现象 08/30 11:11
20F：→ jeffdon2:尚未染色前有用显微镜确认过，分散的的确不如以往 08/30 11:12
21F：推 weisheng0518:那再重抽血, 确定马上抽完马上mix均匀 08/30 11:13
22F：→ jeffdon2:染色之後更糟 08/30 11:13
23F：→ jeffdon2:ok，谢谢weisheng0518大的回答，只好重抽血了 08/30 11:16
24F：推 weisheng0518:Good luck :) 08/30 11:18
25F：推 weisheng0518:BTW, 觉得 EDTA 比较少, 那就不要抽一整管血 08/30 11:21
26F：→ weisheng0518:2/3 管满或更少 08/30 11:22