※ 引述《hchung (hiflypig)》之铭言： : 之前只有养过会贴附的细胞，这次比较大的挑战是大鼠噬骨细胞的培养， : 参考之前paper的作法，不过paper上写的是小鼠的作法， : 想说应该差不多，所以就照着方法作。 : 1.将大鼠腿骨取下，过酒精(15秒)，放进medium : 2.用骨剪将腿骨两端剪开，插入针头用medium将细胞冲出。 : 3.用pipette 将细胞尽量冲散 : 4.离心3240rpm, 5min : 5.吸去上清液後用medium悬浮。 : 6.利用ficoll去除红血球，取中层单核细胞的部分。 : 7.将细胞养在flask，含25ng M-CSF : 8.O/N 取悬浮细胞作培养，加入50ng的RANKL。 : 可是问题来了，我的细胞过了一个礼拜完全没有形成大颗的噬骨细胞， : 後来将细胞取出来用trypan blue看细胞到底是死的还是活的，发现细胞都是死掉的细胞。 : 之後又试了一次，将上面细胞液先抽出(我觉得上面很飘的应该是死细胞) : 再加入新的medium，在shaker上37C 摇了3个小时。 : 结果还是没细胞(冏)。 : 想问板上有没有噬骨细胞培养高手可以解惑呢？ : 另外我想问dentin slice哪里有卖，还是都是自己作比较多啊~~~ : 以上，拜托大家了!! 你好，我做过这实验，但是方法不太相同 1.取腿骨，不过酒精直接放到0% DMEM medium中 2.相同2 3.相同3 4.离心1500rpm，不知道你是否roter大小不同所以离3240? 我是大颗落地式的roter 5.吸上清 6.没做这步，红血球过几天就会死掉了 7.放到10cm dish没加MCSF 8.相同8 另外我们会取一只老鼠的後两只腿骨，以及前上臂骨 种成一盘10cm，因为细胞数太少会分化不出来 如果没有去红血球，我们种到24well中是10^6颗 最後我没有买dentin slice 我买Corning® Osteo Assay Surface 很便宜的，试试看 --

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