作者huuban (冰酒瓶子)
看板Biotech
标题Re: [求救] 用TRIzol抽RNA时 想要去除DNA
时间Wed Aug 24 16:57:20 2011
印象中..TRIzol去DNA的能力应该是很好的 :)
不过咧
还是要看你的样本是什麽,这非常重要
如果是模式物种,我相信应该都超好抽
照你说抽出来的时候质、量都没有问题
那麽不知道denature gel图状况如何?
如果DNA残留很严重,应该是可以看到有一块在 28s 的上面
不知道你们实验室是用什麽 Kit 进行 DNase 处理?
有没有做酒精沉淀?
我之前有用过 Ambion,但可能是操作问题,回收量只有一半左右
一般而言回收量应该要有 80%
这个Kit好处是不用过 chloroform isoamylalcohol
可是因为用了resin,所以听说是超级贵的 (我不敢看价钱 :)
我们实验室有用过 Roche、Fermentas 效果都不错
但都要过chloroform isoamylalcohol,一定会减少回收量
RNAzol要看样本
我们实验室的植物样本,TRIzol不行,RNAzol更惨
建议你想办法拿到试用品
不要冒然去试
或是找资料看看你的样本是否合适
希望对你有帮助 / \
※ 引述《chiehdis (chiehhime)》之铭言:
: 爬文已有相同标题 但还是有些不清楚处想麻烦大家m(_ _)m
: 实验(genomic sequencing)需要大量且较纯的RNA.
: 目前我是以TRIzol抽取 质量都还OK~
: 问题出在最後需要用DNase去除DNA的37度30分钟的incubation.
: 此步骤会让RNA降解非常严重!!浓度直接掉了五.六倍~(nanodrop)
: 胶片也难看到一个极致!!(抱歉手边无图~)
: 想请问各位 有无去除DNA而不伤害RNA的方法??
: 爬文发现 似乎用TRIzol抽就可以把大部分DNA去除???
: 跑非变性胶会看到上面有一大坨gDNA吗??
: (抱歉我没试过~我接收的prorocol都有DNase的步骤)
: (等材料长好~我会试试看!!)
: 另外 听说有不需要incubate的去除DNA方法???
: (某种试剂加入几滴即可??)
: (正等待消息来源寄给我相关资讯)
: 还有一个约是TRIzol价钱两倍的新产品 RNAzol (第四代??)
: 在实验中可以不用加chlroform 也可以省掉DNase
: (偷偷说现在有试用品可以拿~不过只有3ml的样子Q口Q)
: 可是真的爆炸贵的!!!
: 该如何是好??
: 麻烦大家了!!
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◆ From: 140.112.82.238
1F:推 chiehdis:非常非常感谢你!!!!! 09/28 22:40