作者GauJin (高进®)
看板Biotech
标题[求救] 配细胞培养液的正确方法?
时间Tue Aug 23 22:59:30 2011
是这样的 因为我们不是生科相关科系 但是因为需要做到细胞测试
所以要配细胞培养液 想不到两个带我的学长在配法上竟完全不同
学长A:
配置前在血清瓶内装满1 L的去离子水 再进灭菌釜灭菌
灭完之後 将无菌水放入无菌操作台照射紫外光
同时也将配置细胞培养液需要的碳酸氢钠粉末称量好拿进去照射紫外光
最後将罐装细胞培养基粉末放入
之後 一起将药品加入无菌水 整瓶血清瓶拿起来摇晃使之溶解
过无菌滤膜 分装完成
学长B:
直接在室外拿1 L烧杯装入950 mL去离子水
再将碳酸氢钠和细胞培养基粉末加入 以磁石搅拌
再加50 mL去离子水冲洗罐装内残余粉末後倒入烧杯
接着直接将烧杯拿进无菌操作台 过滤膜滤至已灭菌之大血清瓶
最後再将大血清瓶内之培养液分装至小瓶
学长A说学长B那种作法不行 很容易污染
学长B却说学长A那种作法麻烦不必要 浓度也不会正确 也说他这样配都没污染过
因为是新生 不晓得哪个学长说的是正确的 也不知道要跟着哪个做法
想请问大家指导 拜托了 感谢!
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我是赌神高进 不是杂碎高义
高义，你个仆街仔。
高义，你他妈杂碎。
沟一，哩机咧糙淑辣。
馆一，雅没给某种。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.38.3.170
1F：推 milkpa:B 08/23 23:03
2F：推 ls4860:如果有过膜的话 我觉得b也是可行的 虽然我是用a的方法 08/23 23:07
3F：推 sdgaejr118:我们都是照学长B那样配 养到现在没有污染! 08/23 23:09
4F：推 birdddd:B 过膜也可以把菌给过滤掉(霉浆菌好像不行) 08/23 23:12
5F：推 iceking:B是对的 08/23 23:12
6F：→ birdddd:我觉得你可以从culture的书籍开始看 学长姊教有时会有错误 08/23 23:14
7F：→ iceking:霉浆菌好像要用.1的Filter (sales说的) 08/23 23:14
8F：→ birdddd:观念 08/23 23:14
9F：推 iceking:附带一提:照UV是没有办法杀菌的,你可以请学长A爬爬文,看一 08/23 23:17
10F：→ iceking:下无菌操作台的原理~ 08/23 23:18
11F：推 chosenone:推birdddd 实验方法 仪器操作 从前辈那里学来之後最好再 08/23 23:23
12F：推 genep:B 08/23 23:23
13F：→ chosenone:找找文献书籍和仪器说明书 前人传下的方法有时会多或少 08/23 23:24
14F：→ chosenone:其中某些步骤 有时会造成自己很大困扰 08/23 23:25
15F：→ trumpet:B，A的作法有点多此一举，照紫外灯的意义为何?! 08/23 23:25
16F：推 vandia:B A拿粉末去照光的时候 难道会去翻动嘛?不然怎麽确定杀菌 08/23 23:33
17F：→ vandia:够不够彻底,有没有每一个死角都照到 08/23 23:33
18F：→ a90648:UV怎麽会不能杀菌? 只是操作台不是利用UV达到无菌吧 08/24 00:49
19F：推 conective:A干麽一直照UV...水已经灭菌过已经无菌最後过滤膜就好了 08/24 01:05
20F：→ conective:粉末照uv的意义到底在哪... 08/24 01:06
21F：推 conective:一般过.22的滤膜 但不保证霉浆菌 08/24 01:09
22F：→ conective:A的浓度这样配也不正确 应该是加入粉末後定量至1L 08/24 01:11
23F：→ conective:你随便找个药品 上面写的一定是这样 add to 1L 08/24 01:11
24F：推 conective:看到A的配法一直猛摇头..到底在干麽 有点像在装忙 08/24 01:15
25F：→ conective:不是步骤多就是小心 就不会污染 生物实验室都用B的方法 08/24 01:16
26F：→ conective:你之後如果是从A那边听来 关於非本科的知识 最好小心 08/24 01:17
27F：→ conective:很可能是他自己的理解 而不是常用的作法 08/24 01:18
28F：推 Ianthegood:B 08/24 01:27
29F：推 a001ou:UV穿透力这麽弱 照UV到底有什麽用?? A的配法完全是自以为是 08/24 02:53
30F：→ a001ou:而已 重点是过膜过程别污染就好 另外你们的培养基不用加血 08/24 02:55
31F：→ a001ou:清吗? 若需要加10%血清 那培养基的体积应是0.9L而非1L 08/24 02:57
32F：→ a001ou:UV绝对可以杀菌 但UV穿透力极弱 若有测过Hood UV强度的人 08/24 02:59
33F：→ a001ou:就会知道把senser放在灯管旁跟操作台上这样短短地距离 08/24 03:00
34F：→ a001ou:UV强度可以差到快10倍 根本没杀菌力可言 08/24 03:02
35F：推 Realthugz:A学长用摇晃...真不专业 两者也没调pH的动作? 08/24 03:33
36F：推 Realthugz:至少我呆的两个lab都有调啦 现在的还会调渗透压... 08/24 03:35
37F：推 lucidol:我的配法大致跟B很类似,但我有调整pH值跟加FBS,另外过滤可 08/24 10:16
38F：→ lucidol:以把徾浆菌以外的菌滤除,a的方法有点太多余反而会增加污染 08/24 10:17
39F：推 iceking:我的意思是操作台的UV无法达到实际杀菌效果 08/24 10:17
40F：推 lucidol:机率,倘若担心霉浆菌污染,可以用0.1um滤膜过滤或加入抗生 08/24 10:21
41F：→ lucidol:素(如biomyc-1 ~3)稀释加入培养基 08/24 10:22
42F：→ lucidol:操坐台的uv确实无法达到完整杀菌效果,重点是使用前的清洁 08/24 10:24
43F：→ lucidol:使用物品的杀菌,操作手法,以前我很少开uv 也都没甚麽污染 08/24 10:25
44F：推 leoblack:B才对~A一整个错超大,浓度错又浪费时间 08/24 10:32
45F：推 FENOR:B才是对的。 UV根本照不透玻璃，所以A的手法做一堆白工 08/24 10:34
46F：→ FENOR:A的做法真的有必要的也只有第一步的将去离子水灭菌 08/24 10:35
47F：推 carlyu:A好怪 = = 都不调pH的喔.. 08/24 10:40
48F：→ carlyu:如果会怕...加anti 08/24 10:40
49F：→ carlyu:猪养殖研究中心好像有资料? 或是ATCC的 08/24 10:41
50F：推 cocodo:照UV可能是想杀死瓶子外面的细菌吧..我猜 08/24 19:01
51F：→ cocodo:调pH都经经验法则，两公升培养液加多少5N盐酸，也是很愉快 08/24 19:02
52F：推 bluejay:B +1 过filter後 就是无菌状态!! 08/24 21:55
53F：→ untilnow:B 08/25 00:39
54F：推 oscar206:B+1~之前实验室是这样做的 08/25 00:39
55F：推 xiphos:B是对的 A的浓度错了（整个在装忙） 08/25 00:52
56F：→ alicialai:其实UV真的不能"杀"菌, 只能抑制细菌生长~~~~~ 08/25 06:22
57F：推 andy15053:B 照紫外光是没效的.....又浪费时间 08/25 13:08
58F：推 datro:B A根本是不董原理装懂 08/26 01:33
59F：→ lovenainai:B 08/26 12:33
60F：推 GFP:B，但ddH2O有先灭过菌 08/29 19:18
61F：推 fwklboy:b 08/30 23:21
62F：推 greendeer:跟A学长说: 你错了! 09/07 18:45
63F：→ SPK:B 09/20 02:06
64F：推 warmheaven:B 10/31 16:50