作者hchung (hiflypig)
看板Biotech
标题[求救] 大鼠噬骨细胞Osteoclast primary culture
时间Sun Aug 21 01:28:19 2011
之前只有养过会贴附的细胞，这次比较大的挑战是大鼠噬骨细胞的培养，
参考之前paper的作法，不过paper上写的是小鼠的作法，
想说应该差不多，所以就照着方法作。
1.将大鼠腿骨取下，过酒精(15秒)，放进medium
2.用骨剪将腿骨两端剪开，插入针头用medium将细胞冲出。
3.用pipette 将细胞尽量冲散
4.离心3240rpm, 5min
5.吸去上清液後用medium悬浮。
6.利用ficoll去除红血球，取中层单核细胞的部分。
7.将细胞养在flask，含25ng M-CSF
8.O/N 取悬浮细胞作培养，加入50ng的RANKL。
可是问题来了，我的细胞过了一个礼拜完全没有形成大颗的噬骨细胞，
後来将细胞取出来用trypan blue看细胞到底是死的还是活的，发现细胞都是死掉的细胞。
之後又试了一次，将上面细胞液先抽出(我觉得上面很飘的应该是死细胞)
再加入新的medium，在shaker上37C 摇了3个小时。
结果还是没细胞(冏)。
想问板上有没有噬骨细胞培养高手可以解惑呢？
另外我想问dentin slice哪里有卖，还是都是自己作比较多啊~~~
以上，拜托大家了!!
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