作者eoll (end of life)
看板Biotech
标题Re: [求救] HIF-1a 的western 条件
时间Thu Jul 28 00:51:02 2011
不好意思，借标题想问一下抽RNA的条件
我是用头颈癌的细胞(重复paper的实验)和肝癌细胞，在低氧浓度下生长
抽RNA，用qPCR观察HIF-1A的表现量
理论上和control相比(normoxia)应该是要增加的
可是一直做不出来，延长天数也完全不见HIF-1A增加
我担心是在收trizol的过程中，HIF-1A已经degrade了
想请问一下板上有人也是抽RNA观察HIF-1A的吗？
有什麽地方需要别注意或是有什麽方法可以避免HIF-1A degrade的？
先谢谢大家 :)
※ 引述《Basketball (future)》之铭言：
: 最近在跑HIF-1a
: 不知道是不是transfer的问题还怎样
: 一下压得出来同样sample同样condition又压不出来
: 不知道版上是否也有人在跑HIF-1a的能否给我些意见
: 我使用是8%下胶 3%上胶
: transfer是使用湿式 400mA 70分钟 (实验室学姐之前用此条件跑iNOS 130KDa都有跑出来)
: gel用comassin blue染後确定有transfer过去
: memb.用丽春红染有淡淡的protein(所以不知道是不是transfer条件不好?)
: 压出来有时候有 有时候没有
: ECL 也用过advance的 也压不出来
: sample 每well load 50ug(是细胞的 所以应该算load够多了)
: 总之 请有在跑HIF-1a的给我些建议
: 谢啦.
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.36.3.251
※ 编辑: eoll 来自: 114.36.3.251 (07/28 01:09)
1F：→ williamyang:hypoxia是让HIF1a的蛋白质变稳定.而不会影响mRNA表现 07/28 07:52
2F：→ williamyang:所以HIF1a mRNA表现没有差异是正常的 07/28 07:53
3F：推 ssuny:推 hypoxia只会影响蛋白质稳定 不影响mRNA 07/28 17:21
4F：推 wingnice:那请教是只要HIF-1 RNA都不会增加?还是只有低氧不增加? 08/03 01:33