作者ararthur ()
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标题[求救] 1.5% TAE agarose 跑DNA W形状的band?
时间Mon Jul 4 13:58:54 2011
就正常跑Cloning步骤PCR完的产物
想要是1383nt的band
但跑出一个Ｗ形状的band
http://imageshack.us/f/202/25553467.png/
请问有人知道这样大小要如何判断吗?
可能是什麽原因造成这样的band呢?
overloading? [ion]过高? 100 Volts过高?
谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：推 leoblack:overloading比较有可能~你buf是新的?! 07/04 14:23
2F：→ ararthur:嗯 刚好是新的 而且同块胶也有同时跑其他PCR产物 很正常 07/04 15:12
3F：→ ararthur:然後我有减半跑 这次就恢复正常 只是还是想知道原因^^" 07/04 15:14
4F：推 Realthugz:这marker.... 确定胶没问题? 07/04 15:37
这是第一次跑和後来减半跑的DNA pattern
http://imageshack.us/f/684/89384811.png/
两次都是同样的Sample, tank, buf, date, 并为同一批gel
然後也刚好都有学姐在我loading的同一块胶一起跑其他pcr产物
(RT-PCR 100~200nt + 100bp marker)
看起来量减半跑以後band就整齐多了
不过比较有疑问的地方是:
1.旁边学姐跑的情况似乎都正常，为何我的gel一边不正常一边正常
2.为什麽我两次跑的胶 DNA pattern差很多?
请问大家意见
谢谢
※ 编辑: ararthur 来自: 140.112.121.97 (07/04 16:21)
5F：推 Realthugz:等一下... 2张的marker都不是我能接受的正常范围... 07/04 21:15
6F：→ a90648:marker怎麽都糊成一团!! 07/05 00:28
7F：→ ararthur:会是focus还是gel的问题? 07/05 10:56
8F：→ ararthur:还是1.5%跑全速的问题 07/05 10:57
9F：→ shenhsu:我觉得是gel问题 07/05 13:09
10F：推 Ianthegood:还是overload 再减半跑看看 连marker都要减半阿 07/05 13:37
11F：推 Realthugz:我1.5%跑100V不会这样 再配全新的胶跟buffer试看看... 07/05 16:22
12F：→ Realthugz:小well marker差不多3ul就够了... 07/05 16:23
13F：推 yaliu:同意～marker也太糟了，我都怀疑是不是快坏掉了，才有那麽多 07/06 19:29
14F：→ yaliu:smear...然後量真的下太多了...你的marker胶用1%应该比较合 07/06 19:31
15F：→ yaliu:适...虽然我也用过1.5%没发生这种情形 07/06 19:31
16F：→ yaliu:然後建议你可以再跑远一点，然後看起来你的大小没很大，要不 07/06 19:33
17F：→ yaliu:要100bp~3kb的marker，胶用2%(1.5%应该也可) 07/06 19:34
18F：推 haoen:觉得是buffer的问题 不然就是gel 其实1.3K跑0.8%就够了吧 07/08 06:37
19F：→ ararthur:嗯 其实只是刚好有1.5%的胶拿来跑而已XD 07/08 14:11
20F：→ chvkimo:我也认为全部都是加太多量的sample 07/24 12:45
21F：→ ararthur:回来解答 後来发现是本LAB换了safe dye的缘故 09/13 16:30
22F：→ ararthur:如果是用EtBr或是其他厂牌的就不会了 09/13 16:30