※ 引述《starjim (Jim)》之铭言： : PCR完跑胶 : 但是卡在internal control一直不equal : 导致一直无法继续往下做 : 我用的internal control是beta-actin : 已经重新跑过几次PCR了 : 甚至连RT都重做了 : 可是就是一直卡在某个lane比较weak : 每次跑完就是那个lane比weak : 甚至我还把PCR完的product拿去用nanodrop测DNA浓度 : 结果是每管的浓度都差不多 分享我的经验，如果和大家的见解不同，希望大家和我一起多讨论! 关於测浓度这件事 在PCR完後，转cDNA後 测的浓度包含了样本中的dNTP/rNTP、用剩的primer和solvent中其他的物质 这些在OD260都会吸收的! 所以没办法反应出真正的PCR product量 要测的话 要先做完clean-up(酒精沉淀或用kit)再测才是准的 : 我已经想不到有什麽方法可以解决这问题了 : 请问板上的高手有什麽其他的方法吗? : 谢谢~~ 关於internal control equal这个要求， 我觉得样本处理的很重要， 我的经验是，每一管的组织/样本量一定要固定， 固体组织类的要确实秤量， 例如叶子等的要确实吸乾表面上的水再秤， 细菌的定量，一定要确实用pippet弄散测完OD，再取菌液做实验 还有如果是微量核酸样本的话(像血清中的病毒)， 要加入carrier RNA/DNA (>3ug)後再纯化，才能确保纯化过程中每一管的效率相等， 另外如果要做RT，RNA纯化的最後一步要用DNase处理， ELUTION完成後再以OD260的值来normalize，确保拿去做RT的RNA量相同， (有些方法或kit不保证能移除PRIMER，这时不适用) 然後在配PREIX时，我建议在分装PREMIX时，每一管都要用新的TIP， 因为有些TIPA体沾黏，这样通常会造成最後几管的值怪怪的， --

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