作者starjim (Jim)
看板Biotech
标题[求救] PCR 跑胶internal control一直不equal
时间Thu Jun 16 20:46:40 2011
PCR完跑胶
但是卡在internal control一直不equal
导致一直无法继续往下做
我用的internal control是beta-actin
已经重新跑过几次PCR了
甚至连RT都重做了
可是就是一直卡在某个lane比较weak
每次跑完就是那个lane比weak
甚至我还把PCR完的product拿去用nanodrop测DNA浓度
结果是每管的浓度都差不多
我已经想不到有什麽方法可以解决这问题了
请问板上的高手有什麽其他的方法吗?
谢谢~~
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.31
1F：推 flyeagle1978:PCR跑完去测浓度 没有意义 因为buffer有盐类 会干扰 06/16 21:00
2F：→ flyeagle1978:你换GAPDH试试吧 06/16 21:01
3F：→ starjim:因为我只是想确定product浓度是不是一样 06/16 21:03
4F：→ starjim:那测cDNA的浓度会有意义吗?因为我也有测= = 06/16 21:04
5F：→ boblu:每一管都有盐类 背景值应该相同吧？ 06/16 21:13
6F：→ boblu:不然 blank 可以用一管没跑 PCR 的 mix 去做 06/16 21:13
7F：→ Realthugz:恩... 照样可以normalize吧 可能你那特定sample的 06/16 21:26
8F：→ Realthugz:RNA quality比较差一点 06/16 21:26
9F：→ Realthugz:只要cycle数抓住 还是可以normalize吧 06/16 21:27
10F：→ Realthugz:不然就是那组的treatment造成细胞数差异 06/16 21:28
11F：→ Realthugz:根据你的叙述跟我的经验 我也只能这样troubleshooting 06/16 21:29
12F：→ harry:cDNA或PCR产物若未纯话去测浓度差不多，只能表示你的dNTP 06/16 21:34
13F：→ harry:加的很准，你可以直接拿一点dNTP去测就知道了 06/16 21:36
14F：→ jsi:可能beta-actin不是这实验适合的internal control,建议可多找 06/18 04:53
15F：→ jsi:找几种常用的internal control gene做做看 06/18 04:54
16F：→ mzac1b:那就把其他lane 都弄到一样weak 06/18 05:23
17F：→ mzac1b:不然就换GAPDH吧 06/18 05:26
18F：→ starjim:目前又做一次已经算equal了~另外我也跑了GAPDH 06/18 18:43
19F：→ starjim:只是还没跑胶而已~谢谢各位的帮忙~~ 06/18 18:43
20F：→ Danielle:差很多吗? 没有差很多的话可以用image J做normalize 06/20 16:38
21F：→ Danielle:如果差到肉眼可见两倍以上就有点多了 06/20 16:38
22F：→ starjim:我是用image J定量耶 06/20 17:47
23F：→ starjim:可是肉眼看起来差不多~但是订了就差大约0.9倍左右 06/20 17:48
24F：→ starjim:订了之後跑完肉眼看起来差不多 06/20 17:48