作者DJHINN (dj)
看板Biotech
标题[讨论] 关於housekeeping gene
时间Tue Jun 14 14:46:38 2011
最近开始着手操作 real-time PCR
首先就利用 Actin primer pairs 这个 housekeeping gene 练练手
顺便计算其 amplication efficiency
但是我发现
仅加水的对照组，却也跑出相同的产物
於是第二次我就将所有东西都换新的
包括 1. real time PCR Mix solution
2. 新的稀释过的 primer
3. 新分装过的水
结果第二次结果...水仍然跑出产物
而且我将结果拿去跑电泳，水的对照组可以看到清楚的条带 (同产物)
因为我们实验室主要的材料对象是昆虫，也常常会在冰桶上做研磨的动作
昆虫有时也会飞出....
这样有可能会到处污染吗? 由其是 housekeeping gene 这种超灵敏的 gene
不知道是否有前辈有遇过这样的问题?
目前: 我重新将血清瓶洗涤过後，灭了新的 二次水
等一下会用一般PCR测试看看到底问题是不是出现在水上面...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.80.2
1F：→ shenhsu:还有可能是primer dimer 如果是的话请重新设计~ 06/14 15:02
2F：推 HEK293:或是把Primer浓度弄再低一点 06/14 15:03
3F：→ DJHINN:primer dimer 会形成很sharp的条带吗 @"@? 06/14 15:13
4F：→ DJHINN:Melting point 都一样耶 XD 06/14 15:13
5F：→ DJHINN:而且看melting curve 仅有一个peak出现... 06/14 15:18
6F：→ DJHINN:应该不是dimer的问题.....吧 XD 06/14 15:18
7F：推 jabari:定序看看... 如果污染的话, 就说服自己primer设计得很灵敏 06/14 15:36
8F：推 captdavince:很害怕污染的话，建议改用UDG系统.换dUTP.enzymes 06/16 07:20