作者premire (热腾腾的泡面)
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标题[求救] 关於s-nitrosothiol(RSNO)之萤光侦测法问题...
时间Tue Jun 14 03:07:56 2011
小弟目前将小分子RSNO, GSNO(S-nitrosoglutathione)
先以Hg来使GSNO的NO group 释放後和2,3 diaminonaphthalene（DAN）
反应30min後形成萤光产物NAT 设定EX：306, EM:430来观察萤光值
并加入NaOH终止反应
另以不含Hg,Hg(-)当作blank 以文献中所说的方法 比较Hg(+)/(-)萤光值差
推估GSNO所释放的NO量
以上方法用来配制GSNO的standard curve
不过这几次都发现30min後 1 uM, 0.5 uM及 0.25 uM其Hg(+)确实高於Hg(-)
低浓度的GSNO（0.125 uM）之後其Hg(+)组萤光值低於Hg(-)
这样意味着这些组在30 min後其NAT量低於blank
Hg(-)照理来说不应该会产生NAT 更不应该高於Hg(+)
目前认为有以下原因：
1.低浓度GSNO在检测下限 故萤光值会飘动
2.NAT在30min内有产生dacay现象 （故缩短时间可能可以看到Hg(+)高於Hg(-)）
不知道有没有经验大大能指导 感激不尽！！！
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