第一次在这边发文
如果格式有问题的请不吝指教
今天抽RNA时(用REZOL)因为我的细胞量少，大约只有8*10^5，所以REZOL加了大约100ul
接着加入约20ul的chloroform静置後离心取上清液
接着加isopropanol静置半小时以上，THEN 离心去上清液
在所有sample中某一管的纯度A260/A280只有1.53左右，其他大约都在1.7附近
现在不知道RNA纯度1.5左右可不可以继续做RT
请各位不吝提供经验指教，谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 111.250.13.90
※ 编辑: starjim 来自: 111.250.13.90 (06/05 22:35)
1F：→ shenhsu:我们实验室是以跑胶看到shape band为能够继续做RT的标准 06/06 00:25
2F：→ shenhsu:RNA纯度应该是>2.0 所以你的sample可能有DNA或protein残留 06/06 00:26
3F：→ shenhsu:不过如果之前1.7左右都OK 那只要RNA quality好应该就OK 06/06 00:28
4F：推 kakaman:还是可以做 06/06 01:04
5F：推 vancent:一搬rtpcr其实没差 06/06 01:10
6F：→ starjim:想请问纯度会影响到後面转cDNA和PCR後的跑胶吗? 06/06 01:10
7F：→ starjim:那纯度是会影响後续哪个部分? 06/06 01:11
8F：推 kakaman:你可以试试看阿 我以前1.5左右还是照用... 06/06 01:12
9F：→ sackler:usehot acid phenol extraction again 06/06 11:23
10F：推 birdddd:1.7以下我就不用了耶 可能有杂质 06/06 16:03
11F：→ starjim:那请问我如果做再次纯化的话会比较好吗? 06/07 00:03
12F：→ FUJI0904:其实我觉得用这种抽法的话，因为细胞量少而减少REzol的 06/11 14:36
13F：→ FUJI0904:使用量并不会比较好抽，因为如果你用的是一般的1.5 ml 06/11 14:37
14F：→ FUJI0904:微量离心管，最後上清液会非常「薄」，很容易取到中间介 06/11 14:38
15F：→ FUJI0904:面层，就会容易吸到DNA或protein。 06/11 14:39
16F：→ FUJI0904:我建议如果下次还要做，还是用1 ml的REzol + 200 ul的 06/11 14:40
17F：→ FUJI0904:氯仿，毕竟至少200 ul的上清液其实相对较好吸取 06/11 14:41
18F：→ FUJI0904:而且比较可以不怕吸到中间层，不用担心细胞太少的问题 06/11 14:42
19F：→ FUJI0904:RNA的浓度决定在你最後的回溶，而不是一开始REzol加的量 06/11 14:42
20F：→ starjim:我有加过比较多量的REZOL~可是离完心後上清液变的不透明 06/12 15:20
21F：→ starjim:会有点粉红色的REZOL的颜色 06/12 15:20
22F：→ FUJI0904:要不要试着离久一点，我抽100万颗还是用1c.c.也没啥问题 06/15 11:17