作者xenosaga1026 (sam)
看板Biotech
标题[求救] 去除SDS方法
时间Thu Jun 2 17:29:53 2011
目前实验设计是要用IP的方式将目标protein抓下来
跑SDS-PAGE後挖点
再用Mass的方式来看interaction protein
因为使用的是culture cell (293T)
怕IP下来的protein量太少Mass会打不到
所以目前打算将protein从protein A/G agarose上
用 1% SDS elute下来
再将4个sample(10cm dish)一起通microcon来浓缩
但问题是我怕浓缩後盐类浓度及SDS浓度会过高
不知道microcon能不能去除SDS
亦或是有其他方法可以去除SDS呢?
目前实验面临最大难题就是protein量不够
Mass打出来的结果都在不可信区间(用Mastco搜寻 band都在绿色区间)
虽然score都有25以上 不知道这些到底能不能用
谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.64.74
1F：推 hangzer:Dialysis? 06/02 20:14
2F：推 Rarelay:为什麽不用 pH 2.0 glycine buffer elute? 06/02 20:40
3F：→ xenosaga1026:glycine elution的效果好像没有SDS好 06/02 22:22
4F：→ trumpet:2楼的重点是pH2.0，不是glycine，Protein A/G用pH2.0就OK 06/02 23:08
5F：推 Rarelay:mass分数低不是蛋白量不够，是挖胶後纯化过程有污染吧。 06/03 00:07
6F：→ skylawer:请问上MS前到底是 in gel or in solution digestion? 06/03 01:46
7F：推 chosenone:microcon是用分子量大小去筛 大部分的盐和SDS都会流过去 06/03 13:51
8F：→ chosenone:不过要注意你要看的蛋白分子量大小 不要选到太大的 不然 06/03 13:52
9F：→ chosenone:你要看的蛋白也流过去了... 06/03 13:52
10F：→ xenosaga1026:谢谢大家的宝贵意见~上mass是in gel 06/04 00:41
11F：→ wh0612:可以用Z-tip desalt? 06/04 16:28
12F：→ xenosaga1026:zip tip 我怕lose太多peptide 06/05 00:22