※ 引述《yesdora (话不投机半句多)》之铭言： : 我在跑western时有时会出现像下面这样的结果 : 10% gel，stacking 80V 30min, running 150V 50~60min : 拍出来的图片(上半部) http://ppt.cc/I!-r : 拍出来的图片(下半部，beta-actin) http://ppt.cc/q5rD : 这个同一张膜，我在打一抗之前才把它剪成上下两片 : 在上半部的下端可以看出来它扩散了，如果我不剪的话拍出来的照片应该会像梯形那样 : 这样是smiling吗？ : 我一直都会同时跑二片胶 : 但通常出问题的都是其中一片，另一片就很正常(笔直的往下跑) : 所以是哪个环节出问题了我也一直很困惑 : 不晓得是哪里出问题了，请强者们救救我！ : actin被切掉的那个sample我不就等於白做了@@ : 另外，我看的蛋白质都很大…273和280kda : 为了区就actin只好用10%的gel : 不晓得有没有方法可以让大分子量的蛋白质分离的更开然後又可以用actin补正的方法吗？？ : 先感谢大家！m( _　_ )m 1. 用gradient gel 2. 用低电压跑 我的习惯用85v跑前10分钟 之後用100v跑 3. 就是中间的running buffer 有时候会因为电压的高热蒸发掉 要视时机补满 个人经验是如果没有是时机补满, 会跑出所谓的笑脸(smily curve) --

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