作者nurXiah ()
看板Biotech
标题[求救] Western认不到target protein
时间Sat May 28 20:19:32 2011
目前Western呈色出现了问题
两张膜是同样的抗原,不同批收下来的,loading浓度相同
一抗1:1000,室温作用2hr,wash 10min x3
二抗1:10000,室温作用1hr,wash 10min x4
抗体两者都是reuse, 前一张呈色能看到target protein,没有看到杂band
後一张只看到一条明显的杂band,没有target protein
呈色时间後者比前者久,SDS-PAGE都有看到target protein
transfer之後染色也确定有转渍过去
抗体使用只差了一次而已 我的笨脑袋实在想不透到底为什麽会这样?
请教各位实验条件能够做什麽调整 谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.118.112.128
1F：→ milkpa:就抗体力价不足啦，差一次就够他消耗了 05/29 00:38
2F：→ gryou:有些抗体只有一次性 05/29 02:35
3F：→ nurXiah:所以是ㄧ抗的问题?二抗不用动吗? 05/29 11:17
4F：推 mesenchymal:reuse的确会有差 二抗可以的话也不要reuse 05/29 11:38
5F：→ mesenchymal:一抗要reuse的话也许4度C overnight比较有希望 05/29 11:38
6F：推 reinherd:primary我们只有4c overnight才重复用,2nd Ab不重覆 05/29 11:49
7F：推 jamesonly:不知道能不能重配一抗重压一次? 05/29 20:49
8F：→ nurXiah:我们家一定都得reuse......之前用新配的5000X一抗,可是背 05/29 21:30
9F：→ nurXiah:景很杂,所以又换回reuse的1000X~如果一抗4度C O/N,二抗还 05/29 21:33
10F：→ nurXiah:要换新的吗?另外再问一个,为什麽titer掉了反而是非目标基 05/29 21:35
11F：→ nurXiah:因比较明显?我以为会是剩下的抗体都target到目标蛋白上,杂 05/29 21:38
12F：→ nurXiah:band反而会减少...... 05/29 21:39
13F：推 kakaman:二抗不是不可以重复使用,用个两次左右就换了吧 06/06 01:10
14F：推 Ferry:东省西省浪费的只是你的时间 06/06 16:52