作者jeffsu (欧巴马)
看板Biotech
标题[求救] 关於 SDS-PAGE 的问题
时间Mon May 23 16:51:46 2011
由於最近跑western 都跑不好看，但重配所有的成分仍无法改善
因此想徵询看看板友的意见
以下我们实验室的SDS-PAGE成分
下胶 10% 12.5% (不同%结果仍相同)
ddH2O 4.2ml 3.2ml
30% Acrylamide-0.8%.... 4.1ml 5.1ml
1.5M Tris-Hcl pH8.8 3.0ml ''
APS(0.1g/10ml) 0.6ml ''
10% SDS 120ul ''
TEMED 10ul ''
上胶
ddH2O 2.7ml
30% Acrylamide-1.2%.... 0.7ml
0.5M Tris-Hcl pH6.8 1.3ml
APS(0.1g/10ml) 250ul
10% SDS 50ul
TEMED 10ul
上胶 100V 下胶140V (全程100V 仍无法改善)
跑出来的band 大概都是^^^^^^^^的型状 (有点类似倒V，但没那麽弯)
大概跑道下胶後由Dye就能看到这情况，跑完再transfer後用Ponceau S
确认过是跑胶就有的问题，因为以前用相同条件跑都没问题，但最近怎麽跑
都是一样的情况，我们实验室也有跑zymography，也发生相同的问题。
想问看看是甚麽问题造成的，或是那个原始成分坏掉可能出现这种情况
希望有版友能帮忙，感谢~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.138.38
※ 编辑: jeffsu 来自: 140.128.138.38 (05/23 16:59)
1F：推 skenzo:我是用上胶 80v 下胶100v 05/23 18:13
2F：→ jeffsu:以前用相同伏特跑起来并无问题，可能跟伏特无关 05/23 18:20
3F：推 leoblack:buf pH值有无跑掉?!APS配完分装冰-20,用的才放4度C 05/23 18:22
4F：→ leoblack:以前的经验是这3个sl'n出问题~ 05/23 18:24
5F：推 dodomilk:我也觉得可能buffer的pH值有问题，检查看看吧！ 05/23 20:17
6F：推 impervious:确认看看SDS有无变质，之前实验室有发生过类似状况 05/23 21:33
7F：→ impervious:10 percent APS 我都是新配的 05/23 21:34
8F：→ cloneting:protein或盐浓度太高 降低浓度或透析试试看 05/24 12:14
9F：→ jeffsu:感谢imper大 换新的SDS後已经获得解决 05/25 15:52
10F：→ impervious:能帮上忙真开心 :) 05/25 21:38