作者ws36 (Boris)
看板Biotech
标题[求救] 关於 Dot blot的操作
时间Wed May 4 21:59:23 2011
最近在做dot blot 不知道版上有没有人做过
想请教一下 一直做不出很漂亮的圆点 都是周围深中间浅
而且圆形也有点散掉
我的做法是
nitrocellulose membrane泡过transfer buffer
然後再用PBST wash
接着才放到dot blot(membrane的大小有完全盖过96well)
membrane下方铺filter
然後将机器锁好 开始抽真空
接下来load sample 我是尽量load在well的中心点
load 2ul 4ul 6ul这三种不同量
load完大概5min就将membrane取下
用BSA 1%进行blocking 30min
blocking後加一抗 2hr 之後回收一抗
再用BSA 1% wash 10min 再加入二抗 1hr
二抗结束 wash 30min
然後照ECL看结果
想请问我的作法哪里有问题？？
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