※ 引述《waitingu (Phil-Ku)》之铭言： : 这几天准备牺牲做尾静脉注射癌细胞，打算看转移模式的一批小鼠 : 主要取的器官有lung，但看其他paper也有人会顺便取lymph node，观察其大小 : 1.如何计算nodule数量？ : 查了之前实验室学长姐发表的文献，里面都没有把如何计算metastatic nodule的方法 : 写得详细点的protocol : (例如是取下器官後先数再固定，还是先固定再数；是否需要染色...等等) : 而自己取了两次的经验，固定後组织会呈现白白的，其实看不太出来@@" : 而且自己界定是否为nodule好像也有点主观 : 希望有做过这种实验的版友能不吝分享您的方法，感谢^^ : 2.如何取下小鼠的lymph node : 查了一些大陆网站，里面有说用断颈牺牲的方式会使lymph node充血而不好取 : 但我解剖时根本连lymph node在哪都看不到XD : 有没有版友能分享相关的取样方法呢？ : (之前连结已经失效了) : 感谢^^ 首先感谢vichun版友给予许多协助与建议 由於动物实验自己还是新手，所以整理了一下这几次的心得给其他没做过的板友参考一下 首先，要找到lymph node(後称LN) 对没有学长姊指导，或是非生理(解剖)相关实验室的新手来说，并不容易 (但只要找到一次，之後就很容易上手了) 因此强烈建议皮下注射dye去染色，而paper常看到的是Evans Blue或Chicago sky blue 但一般只做细胞培养的实验室，通常没有这两种dye，因此我参照这篇文献 http://0rz.com/UFyvNs Table 1可以看到，其实常用来记数细胞的Trypan Blue 与plasma proteins亦非常良好，因此参照另一篇文献的方法 http://0rz.com/nFzNQd 1.麻醉小鼠之後(方便注射) 配置0.5%(w/v)的Trypan Blue in PBS，以皮下注射打入小鼠的脚趾上脚背及脚後跟 另外也在离肛门约1cm的尾巴两侧皮下注射，各约20uL (打完会稍微隆起如蓝色小水泡，但过一阵子即消去) 2.30分钟後，以二氧化碳牺牲小鼠 3.以由外而内的解剖方式观察，即可看到淋巴结如同文献中述呈现被染色的状态 (所谓由外而内解剖是指，先帮小鼠蜕皮，此时即可看到淋巴结在血管交会处， 照相观察後，才打开腹腔，观察体内的淋巴结以及其他癌细胞可能转移的器官) 4.计算淋巴结大小，数量，并取样照相等等 目前此方法可以成功看到小鼠AX, IN, PO等部位的淋巴结 但体内renal或是肠系膜的LN，可能由於我的实验设计或是其他因素，没有明显的发现 提供一些心得给想要做此实验的板友，也期待各位的分享指教，谢谢^^ --

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