※ 引述《brume1026 (苍之涛)》之铭言： : 不好意思 : 想请教养HeLa cell的大大 : 刚到新实验室 接手前人的细胞做 : 事情是这样子的 : 我要transfect plasmid进去HeLa cell跟HEK293T 这二株细胞 : (我们实验室用的是Lipofectamine 2000) : 在同样的条件下 : 早上大约10点进行实验 : 隔天要收细胞做实验时 却发现HeLa cell有污染的情形 : (有白白 像细沙的东西) 心有戚戚焉，因为我前阵子也发生过类似的污染， 不过原因倒是一下就找出来了。ddw出问题。 : HEK293T 却没有被污染 : (能排除所有reagents的问题?!) 如果两边用的reagents都完全一样的话那大概就不是这边的问题。 : 之後我从新解冻之前助理所冻的HeLa cell : 一开始我就用DMEM+10%FBS 没有加抗生素去培养 (4/8) : 4/11回来继代细胞 看它也都好好的 没有污染 : (在我用trypsin去切的时候 5分钟後 细胞还是切不太下来!! 之後就给它再切2分钟) 你有试过用trypsin之前先用PBS wash个两次吗? 我以前趴HeLa cell的时候洗两次，通常trypsin下去不用放到37度，30秒都切得下来。 : 所以我就顺便seeding cell 隔天做transfection的实验 : 早上看细胞 也是没污染的情形 : 今天早上10点左右做完 : 下午离开实验时前 却发现它污染了= = : (污染速度好快! 也是白白浊浊的) 从你的描述我猜是细胞本身就有问题了，可能冻的人就没冻好。 : 跟上次同样的reagents : 想请教的是为什麽会发生这种现象?! : 会是细胞本身有问题吗?! 还是有其他可能的原因呢?! : 我想的解决方法以及可能的原因是: : 1.就是在种细胞 分别加入 OPTI-MEM、Lipofeatamine、plasmid以及 DMEM only做检测 用一个6 well把你用的reagent分别加进去(DDW也可以当一组测试) : 2.利用 microplasma kit去检测 3.跟别的实验室借他们的HeLa来用用看。 : 还有其他解决方法吗?! : 请大大们赐教罗 感恩^^ --

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