※ 引述《boblu (六百)》之铭言： : 要搞懂还是弄一套 molecular cloning 来看看比较好 推这本是cloning圣经，有问题先看一下通常就会有解答 : ※ 引述《Johnpolo (隐行)》之铭言： : : 想请问一下 我现在抽完RNA 然後是不是要转cDNA才能ligation : : 那是要用什麽方法 是用一般PCR 还是RT-PCR （以下恕删） RT-PCR一般指的是reverse transcriptase PCR real-time PCR的简写则是qPCR RT-qPCR qrt-PCR或是 kinetic PCR 两者很容易混淆 一般要从RNA做cloning的确是要先转成cDNA再做PCR以产生大量双股DNA 接着看是要直接用限制酶切还是先用TA cloning都可以 个人比较建议先做TA cloning，因为可以先定序， 之後也可以不用每次都还要做PCR，又要担心产物会不会有变异 然後真的有不用ligation的cloning法 1. in vivo cloning http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC310636/ 直接把线状的PCR产物跟载体一起送进特定的大肠杆菌株 它自己会用homologous recombination帮你做 2. ligation independent clongng (LIC) http://bitesizebio.com/2008/02/18/ligation-independent-cloning-primer-design/ 这是用特殊的primer设计，让载体跟PCR产物能形成可互补的序列 除了这两个好像还有很多种设计就是了 但我想J板友应该要去跟实验室的学长姊讨论以确定实验设计 不会就当场问到会，觉得奇怪就立刻问到了解 毕竟板友不是你们实验室的，无法帮忙隔空抓药 祝 实验顺利 --

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