作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] 有关transformation问题
时间Sun Apr 3 00:12:08 2011
※ 引述《smilegirl24 (susu)》之铭言：
: 最近在上生物技术的实验课
: 从PCR→DNA purification→enzyme cutting→DNA ligation→transformation
: 目前学到这里
: 觉得很好奇 从PCR到限制酵素切割 需要经过DNA纯化
: 原因是因为要让从PCR的环境
: 转变成适合限制酵素切割的环境
: 故要经过DNA纯化
: (这样说有错吗?)
基本正确
: 那为什麽在做transformation之前没有做纯化的步骤呢?
: 利用ligation後未纯化的mixed DNA不会影响後面要计算的转殖效率吗?
就单纯取用的 plasmid 溶液体积 和菌液相比甚小 所以就不管了
且ligation 一次用的 DNA 量也很低 再重新纯化又有损失
: 若将plate放太久，是什麽原因造成卫星现象?
有吃到抗药性 plasmid 的那只菌长出的菌落会慢慢把周围的抗生素都分解掉
然後没有吃到抗药基因的菌就也可以快快乐乐的生长了 所谓狐假虎威就是这个意思
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