作者penguinanny (ayumiann~*)
看板Biotech
标题[求救] p53磷酸化的结果不一致
时间Fri Apr 1 00:37:40 2011
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以
ctrl + k 删除後开始编辑文章----
大家好~(*^v^*)
最近我开始接触细胞实验
所以刚开始 学姊是希望可以重复他的结果
但是阿 我怎麽做结果都跟学姊的相反...(= =)
讨论也找不到原因,因此希望可以有人可以帮帮忙~~~
实验目的是有两株细胞(A和B)
然後利用UV(或是HU)造成damage後,看p53磷酸化的表现
学姊的结果都是A比B高,但是我怎麽做都是B比A高
以下为实验过程,不知道哪里比较有可能发生问题~
(因为最近才第一次接触这个 所以很怕有明显错误自己却不知道...)
1.於6mm dish种5x10五次方的细胞於隔天
(细胞数会太多吗???太多的话是不是会影响实验结果勒???)
2.将贴附好的细胞的medium吸乾,照UV(100 J/m2)
照完加入medium培养不同时间点
3.於不同时间点将细胞medium吸乾,用冰的PBS洗一次,
加入lysis buffer把细胞刮下来,冰-80度西到隔天
4.离心取上清液定量
以上就是我处理细胞的过程,不知道有没有哪里做的不好还是做错的部分
谢谢大家 欢迎纠正~~~>"<
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.36.0.199
1F：推 owl628:我也有类似情况,不过我是用MEF,然後用doxorubicin处理造成 04/01 12:22
2F：→ owl628:DNA double strand break,然後看rH2AX的表现,重点每次结果 04/01 12:23
3F：→ owl628:都不一致,完全不知道为啥????? 04/01 12:23
4F：推 celestial318:下次请学姐看你做...尽量步骤一致 04/01 21:23
5F：→ blence:拿你学姊A跟B某个时间点的actin,确认是否是control量的差异 04/01 22:17
6F：→ penguinanny:学姊很忙 没有时间看着我做 不过有尽量问学姊每个步骤 04/01 22:22
7F：→ penguinanny:请问blence我有点不懂你的意思耶~ 04/01 22:23
8F：→ penguinanny:可以麻烦在说一次吗???拜托~谢谢~>"< 04/01 22:24
9F：推 celestial318:确认两株细胞内protein的basal level 04/01 22:33
10F：推 owl628:我好奇问一下,假如他学姊拿30ug去跑,原po拿40ug去跑,这样会 04/01 22:44
11F：→ owl628:导致他们结果完全相反吗????? 04/01 22:44
12F：推 owl628:原PO学姊A跟B拿30,原PO的A跟B拿40跑,这样会有这麽大差异??? 04/01 22:47
13F：→ blence:学姊的30ug是真的30ug,但原po定量的40ug是20ug,这样不会吗? 04/01 22:49
14F：推 owl628:原PO应该有跑internal control吧,所以有差异应该会知道 04/01 23:07
15F：推 sjacky:建议你拿学姐的蛋白定量,跑WB,看b-actin&p-p58结果是否与学 04/02 21:59
16F：→ sjacky:姐相同 3 04/02 21:59