作者ganbaol (ganbaol)
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标题Re: [求救] ligation 的正接反接
时间Wed Mar 23 20:30:41 2011
以前听老师说过
不管你用 heatshock 或者是 Electroporation
将接好的 plasmid 送进细菌
都有机会送入多个 plasmid (如同你说的有正反接情况)
但是随着代数的增加
复制到最後
只会剩下一 "种" 喔 Q Q
至於为什麽就不知道了
但可以知道的是,
挑单一的 colony 就只会有同一 "种" plamid
但多个 copy number的情况出现这样...
※ 引述《rickkao11 (rickkao11)》之铭言：
: 请问一下大家ligation 的问题
: 我的insert用EcoR1切一刀，vector也是一样处理
: 在ligation时,有可能出现正接会反接的情况
: 後来进行transformation，是不是会出现同一个E.coli中同时有正接和反接的plasmid ?
: 请问大家要如何处理这个问题
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.79.149
1F：推 icome:质体不相容 具同样Ori的plasmid只会留下一个 03/23 20:37
2F：推 rickkao11:谢谢您的回答 03/23 21:00
3F：→ chvkimo:老实说, 我又想问质体不相容的原因是啥? 03/24 00:47
4F：→ williamyang:google一下plasmid incompatibility就可以了 03/24 00:54
5F：推 chvkimo:恩 有看到了 谢谢楼上 03/24 01:27
6F：→ a90648:应该不一定剩一个，跟plasmid可容许的copy number也有关吧 03/24 02:11
7F：→ a90648:回错方向..... = = 只会剩一种没错 03/24 02:23
8F：推 bluep:会剩一种，但不是剩一个 03/24 13:20
9F：推 yaliu:1楼正解~ 03/24 13:25
10F：→ icome:对 是剩一"种" = = sorry用字不当 03/24 14:28
※ 编辑: ganbaol 来自: 120.126.57.51 (03/24 18:16)
11F：→ ganbaol:用种比较合理没错 XD 感谢大大的补充~ 03/24 18:18
12F：推 rickkao11:後来想一想，但都是同一种VECTOR，细菌区分的出来insert 03/24 23:00
13F：→ rickkao11:正接反接的差异吗？长度都一样啊 03/24 23:00
14F：→ david6602ok:对细菌它需要是抗生素Re, 正/反接对它生长影响不大吧? 03/26 23:43
15F：→ david6602ok:如果是人要看就设计primer定序便知道啦 03/26 23:44
16F：→ david6602ok:把定序结果去NCBI BLAST align一下 03/26 23:45
17F：推 david6602ok:看是Plus还是minus 03/26 23:47
18F：→ e5f6:答案请看GENE IV 我懒的查了 反正就是会有排斥现象 04/03 00:14