作者trumpet (世界唯一的你)
看板Biotech
标题Re: [求救] IP elution
时间Tue Mar 22 12:58:44 2011
※ 引述《liquidwater (飞得越高是给越多人看)》之铭言：
: 一般IP都会用2X SDS-Dye elution
: 但是如果heavy chain 或是light chain与所
: 要侦测蛋白的位置相近,就会造成干扰
: 现在是查到可用arginine来elute大部分的蛋白
: 而IGG不会,但是arginine很难借到,不知还有
: 什麽方法可减少IGG的污染呢
: 附带问一下为什麽用SDS会有light/heavy chain的干扰呢
: 有爬文但看不是很懂
: 谢谢
一般传统IP是利用Protein A or G bead抓住antibody
再用antibody 去抓supernatant or cell lysate中的antigen
如果你用SDS-PAGE的sample dye去煮,antibody也会和bead分开
和你的东西一起跑进SDS-PAGE里面造成干扰
如果你的东西位置和heavy or light chain位置相近
你可以试试跑non-reducing的PAGE,这样antibody的位置会在比较高的位置
(因为heavy and light chain不会分开)
或只是用其他bead (ex. CNBr bead)把antibody conjugate上去
这样作elute, antibody不至於掉下来,就不会干扰
如果你是用Protein A or G,即使你用arginine作elute, antibody还是会掉下来
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.21.89.218