作者familys (思源垭口)
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标题Re: [求救] 骨头切片antigen retrivel的方法
时间Tue Mar 15 20:47:46 2011
之前做SD Rat bone
染IHC脱钙千万不能用病理科的那种快速脱钙液
我是用 20% EDTA 以10N的NaOH滴定至PH 7.0
头骨大概3周至4周可以脱钙完成
股骨因为股骨头较硬 4周至6周可以脱钙好
如果有实验失败的老鼠 多取几只股骨头下来拿一支来当control
在脱钙後第2周~第3周可更换一次新的20%的EDTA
可以拿细针去刺看看那支当control的股骨头
刺的下去就是脱钙完了
记得要冲水至少半天以上
玻片可以先用poly-L-Lysine先泡过再烘乾就能使用
1. 1% HCl Alcohol 1hr
2. 1% HCl Alcohol 1hr
3. 冲水 1hr
4. Distilled water 10 dips(冲10次)
5. Oven 60。C 烤到乾(泡Poly-Lysine之前要等到凉)
6. Poly-lysine solution 10X稀释 10min
7. Oven 60。C 烤乾即可用
Poly-L-Lysine Solution 厂牌: Sigma 产品编号: P-8920 500ml
後来是懒得泡买现成PolyLysine slide直接用 不过很贵一盒将近NT1000/72片的样子
老板有钱我就好办事
antigen retrivel用电锅隔水加热 DAKO有在卖专门煮抗体用的塑胶盒 绿色的
煮完再加3%H2O2 基本上都能切断formalin的键结
所以问题的症结是在於要用哪一种buffer去煮出来
这就要一样一样去试了 我当初也是试很久
Citrate buffer PH6.0 Citrate bufferPH8.0 Trypsin EDTA.......
能试的全试了 这只能一样样去try 除非抗体说明书上有 否则就土法练钢了
Trypsin就不能用煮的 要放37度 oven. 时间长短也要try 我最久try过2小时都有
之後步骤大同小异了 希望能帮到你
当初我也将检体泡过酒精固定 後来发现泡过10%中性福马林的效果比泡酒精好
教你几个切片的小方法 水浴摊开时 水温最高55度就好了
烘片时 烘箱千万不要超过60度 超过60度对IHC的抗原是个很大的伤害
从烘箱拿出来要脱蜡时 片子一定要先放冷再过Xylene 比较不会掉片
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1F：推 hchung:谢谢你~也谢谢先前回文的大家~~~~ 03/16 01:28
2F：→ hchung:这样我就有动力有更多的方法可以试~~ 03/16 01:29
3F：→ hchung:感谢大家热心提供的小秘方lol 03/16 01:30
4F：推 soom:谢谢这个讨论串的各位，此串已经收录到z-7-8-18 03/16 03:01
5F：推 vandia:非常详细 推推～～ 03/16 10:47
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