作者alicialai (Fairy Monster)
看板Biotech
标题Re: [求救] 骨头切片antigen retrivel的方法
时间Thu Feb 24 19:49:19 2011
※ 引述《hchung (hiflypig)》之铭言：
: 骨头是用石蜡包埋切7 um
: 再用commercial的玻片贴片
: 接着用trisodium citrate dihydrate 配antigen retrival solution
: pH6.0
: 用 hot plate加热到95C
: 不过 我们同时放入骨头跟大脑的石蜡切片
: 只有骨头掉下来...
: 不知道为什麽
: try了好几次都这样
: 大概在70度就飘片了
: 不知道板上的大家有什麽
骨头的切片不是很适合用煮的方式,
因为硬度的关系, 即便你脱钙脱得非常完全,
在切片的时候切到wax and bone交界的时候还是会卡卡的,
这很容易造成一切看不到的连展片後也看不到的小皱摺~
这是造成浮片的主因.. 我那时候已经用到最贵最好的coating玻片,
只要一煮照样浮..
後来是改用1mg/ml Pronase在37度处理30min就不会浮了,
但是Retrival的方式depends on你的抗体抗原喔,
我那时候从trypsin到用煮的用酸的pepsin用commercial的..
甚麽方法都试过了, 还有paper写说要用两种不同的solution (for cartilage)
试试看找一些相关的paper, 应该可以找到作者群是用哪种方式的罗~~
加油~
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