各位前辈好~ 又来询问有关於real rime PCR......真是问题一重又一重ORZ 目前使用biorad IQ5及eva green，原厂耗材 现在每个样本都作三重复，差距最大只有到0.3cycle(还是这样也算大?) 但是standard一直都不好 standard的两重覆其实也不差，但是efficiency就是太高 这些primer之前已经有先用其他样本测试过efficiency，都有97-100.5%之间 是不是序列稀释的问题比较大? 为什麽再也做不出当时的序列稀释了~~~~~ 我一次大约操作72个well 全部样本都加完之後才放standard，在全部一起盖盖子 目前的稀释操作方法是每一管都会换tip，尽量都在液面操作 并且会小小力的vortex一下，然後又弹管子，也会spin down，最後在pipetting几下 请问还有甚麽可以努力的空间??? 谢谢 -- 偶开天眼觑红尘 可怜身是眼中人 --

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