作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
标题[求救] 菌长出来里面什麽都没有
时间Thu Jan 20 16:51:26 2011
这一个月来每次做clone都遇到这样的事情，
在ligation并且transform进去之後到菌落长出来这一个步骤都没有问题，
可是每次用长出来的菌落来抽mini-prep，抽出来的产物digest後拿去跑胶，
每次跑都是空的，连vector都没有，
这是怎麽一回事啊@@
我已经快被这样的情况搞死了.....总觉得我不太适合这一行。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.135.214
1F：推 aeroufo:你菌是不是养过头压 01/20 17:02
2F：→ FENOR:应该不是，我只养了16-18小时(transform完) 01/20 17:06
3F：→ FENOR:挑菌养到MEDIUM里面也只养了六七个小时就抽了 01/20 17:07
4F：推 owl628:挑菌养要不要也养个16小时左右??? 01/20 17:50
其实比较担心的是抽出来是全空的，这次抽出来就是全空的@@
我现在正在让菌长久一点，大概晚上九点还要再抽一次，
应该会跑一个不digest直接比较绝对大小的看看，
如果这样还是空的那我大概得去检查competent cells了。
(可是这一批其实去年十一月用都还好好的...)
※ 编辑: FENOR 来自: 140.112.135.214 (01/20 17:53)
5F：推 owl628:你不digest要怎麽比大小???还有competent cell去年11月好好 01/20 18:01
6F：→ owl628:的,不代表现在就是好好的,担心的话就做个positive control 01/20 18:02
7F：→ FENOR:跟空的vector比@@ 其实我只是想先看看里面有没有东西而已 01/20 18:13
8F：→ FENOR:晚点我来transform一个只有vector的好了 01/20 18:14
9F：推 aeroufo:还有就是你的抗生素加的够不够压，如果不够菌也是会丢掉 01/20 18:15
10F：→ aeroufo:plasmid唷 01/20 18:16
11F：推 iceking:连vector的band都没有吗? 还是只有insert的没有? 01/20 18:17
12F：→ iceking:去测一下DNA浓度吧,说不定抽太少了看不到 01/20 18:18
13F：推 iceking:理论上没vector的菌不太可能会长,要不要检查一下抗生素 01/20 18:23
14F：→ FENOR:是连vector的band都没有......抗生素是新的 01/20 18:25
15F：→ FENOR:抗生素的浓度应该是刚好。 01/20 18:26
16F：→ FENOR:况且就算是杂菌，应该也要有genomic或者是一些小片段 01/20 18:27
17F：推 Ianthegood:手抽过吗?有没可能是miniprep的问题? 01/20 19:26
18F：→ sardine:我有个问题...看时间来养菌这不是个很准的方法 01/21 00:42
19F：→ sardine:你手边没有仪器可以测一下菌的浓度吗 01/21 00:43
20F：→ sardine:另外我觉得抽不到只有一个可能..菌早就死了 在你抽之前 01/21 00:43
21F：→ sardine:就流光了 01/21 00:44
22F：→ FENOR:楼上提到的这点我没考虑过@@ 刚好有仪器，晚点来试试看 01/21 00:56
23F：→ sardine:你用kit抽吗 如果DNA流掉了 在你加各种buffer的时候 01/21 01:03
24F：→ sardine:应该会有几步跟你之前抽成功的时候 加进去的反应不太一样 01/21 01:03
25F：→ sardine:观查一下 01/21 01:03
26F：→ sardine:也可能像iceking说的量太少 总之只要量不够一定会有几步 01/21 01:04
27F：→ sardine:一看就知道不太一样~~~~ 前提是你常常抽 看习惯了.. 01/21 01:05
其实我现在已经看得出来了@@ PD1 PD2 PD3加下去的产生的变化会不一样，
最晚等到离心离下来就可以知道里面到底有没有东西。
不过说真的，失败的经验累积成这样还真的让人哭笑不得.......
※ 编辑: FENOR 来自: 140.112.135.214 (01/21 11:59)
28F：推 icome:摇太久amp都被消耗光当然没plasmid 01/22 14:11