作者mattmatt (乎哩乎哩 N N )
看板Biotech
标题[讨论] SDS-PAGE dye转黄&跑不动的问题
时间Fri Nov 12 22:06:42 2010
我们家用的是垂直电泳
跑SDS-PAGE时经常会遇到dye跑到底部就变黄
然後再也跑不动的情况
这个老症头总是听说因为底部pH变掉
导致dye(pH indicator)变色
应该也有很多人遇过
(电压150V,有冷却系统)
而且不是均匀的变色 总是有某一区会比较早
在继续跑的会 其他未变色的位置就会跑超过黄色条带
整个跑歪就无法比较大小
目前作法是一转黄色就停止电泳 避免不同well跑的距离不同
但最近变色出现的时间实在太早了 离跳海还有1.5cm以上的距离
停止电泳的话 band的分离效果就不够好
但爬文结果大家总是说pH导致dye变色
而pH不对 glycine base的page也跑不动了
检查过stacking 与separating 的tris buffer
还有running buffer, sample buffer
pH与浓度都是正常的
就算换新或重配都是一样的结果
仅知道pH变了
但最终还是得解决这个恼人的问题
不知这个有没有人有方法可以解决?
曾经有人提过可能是APS的问题
不知这个原因&破解法该如何呢?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.80.100
1F：推 icome:每一样都逐一检查 包括配制用的水和电泳槽 11/13 15:17
2F：推 ZecAhau:Running bfr. 应该是主因。你要check bfr. 和milli-Q 11/14 22:13
3F：→ ZecAhau:的pH值.... 11/14 22:13
4F：→ ZecAhau:如果Running bfr. pH is OK, 那有可能是水的问题。 11/14 22:14
5F：推 chung1987:买现成的sample buffer试试 11/15 14:59
6F：→ Anvec:第一个我会想到你的 pH meter 是不是可以校正 tris 11/15 16:37
8F：→ Anvec:因为 bromophenol blue 要转黄的 pH 值还蛮酸的 约3.0 11/15 16:44
9F：→ Anvec:一般电泳的时候不用冷却系统的情况下 温度会小小上升 11/15 16:45
10F：→ Anvec:这会让 tris 的 pH 稍稍降低 约 7 点多 可是我们的 tracking 11/15 16:46
11F：→ Anvec:dye 都还是蓝色的 11/15 16:46
12F：→ kcc0606:胶会产生皱摺吗? 11/15 17:44
13F：→ mattmatt:to Zec: running buf是配10X的stock 使用前稀释成1X 11/16 00:10
14F：→ mattmatt:稀释完会再调pH值 水的话..是有"稍微"偏硷一点.只有一点 11/16 00:12
15F：→ mattmatt:to Anvec: pH meter还真的不知道是哪种电极..便宜货就是 11/16 00:17
16F：→ mattmatt:但这只电极平常有在校正和测量tris buf.以外的东西 11/16 00:18
17F：→ mattmatt:应该是不会偏差太大...明天在关注一下 11/16 00:19
18F：→ mattmatt:但若如您所说bro. blue转黄色要pH 3那还真是极端 11/16 00:20
19F：→ mattmatt:而跑胶启始时还是蓝色 一值到接近最底下才变黄色 11/16 00:21
20F：→ mattmatt:电泳有用冷却系统 温度都满低的 应该不至於让tris pH改变 11/16 00:23
21F：→ mattmatt:to kcc:胶没有皱褶 但胶用CBR染色後 变色的dye会被染色 11/16 00:24
22F：→ mattmatt:国外论坛有提到glycine耗尽的可能 但我不出原理是啥@@ 11/16 00:25
23F：推 bluecsky:把sample补一点tris看看? 11/16 00:45