重新回一篇想说这样比较好看....如果不行请版主告诉我我会删掉这篇在原文底下 重新po一次!!只是想报告我最後成功的条件^^" insert4.7k, vector9.2k Insert先PCR後送入invitrogen的ZeroBlunt vector，再用酵素切出来，gel elute。 Vector则以酵素切开gel elute。 这次我用Roche的一组ligation kit，本身附有自己的ciap酵素。按照说明书去做ciap 後接ligation, 比例I:V=5:1，transform(加完DNA後冰上20min,42度2min,冰上2min, 37度1hr) 隔天收盘，大概长了100颗左右。因为这组很贵, 加上我有另外做一组T4 ligase，已经包含vector only的control所以roche这组就没有 做control罗~~T4 ligase那组的control为0，实验组大概长了20几颗。 roche挑八颗、T4 ligase挑16颗(16度C与4度C分别挑8颗)，用当初接进去的酵素切，结果 roche 8中7，T4..有切出insert大小片段但是vector消失Orz... 之後拿roche那七颗check正反，4颗正接!!有一颗多了一条实际不应该出现的band所以先 不管它= =" 结论:有的时候, 还是要砸点$$(?) 对了，T4 ligase那组我让他ligation两天@@"但还是出现那奇怪的结果.. 以上就是我最後成功的过程罗~~希望能对同样在长片段ligation挣扎的人有一点点参考 作用^^" -- [成就:发现北裂境] 击杀下列其中一只稀有且不好找到的北裂境生物。 ˇ罗奎纳哈克 ˇ克洛许王 ˇ维拉苟莎 ˇ希尔达娜．亡据 ˇ德碁 ˇ大族长裘弗斯 ˇ吐克玛斯 ˇ葛洛克拉 ˇ疯狂的因度雷生还者者 ˇ冰角 ˇ祖尔德拉克哨兵 -台湾玩家 ˇ沸腾憎恨 ˇ『嗜血者』佩洛巴斯 ˇ老晶树 ˇ血色大领主黛昂 ˇ恐惧纺织者 ˇ格里根 ˇ『雕骨者』塞瑞安 ˇ乒乒王 ˇ古老的普崔达斯 ˇ方宝．机风 ˇ奥托纳 ˇ『战争侍女』崴格迪斯 --

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